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微小RNA（micorRNAs，miRNAs）是近年来发现的一类由非编码区域编码的长度约为22nt的单链RNA片段，成熟的miRNA在细胞质中能够与信使RNA（mRNA）结合，影响靶向mRNAs的稳定性，从而达到调控基因表达的目的。有研究报道显示，miRNAs能够调节内皮细胞的迁移、增殖、趋化、抗凋亡等多项生理功能，进而参与血管功能维持、修复、再内皮化及新生血管形成过程，与多种血管性疾病的发生有关，但是其中的作用机制仍有待于进一步的研究。血管内皮细胞生长因子受体（VEGFR）是目前国外研究的热点之一，主要存在于血管内皮细胞表面，具有酪氨酸激酶活性。VEGFR的过表达具有促进内皮细胞增殖、趋化、迁移、抗凋亡，促进血管修复、再血管化、加速新生血管形成、抗血栓，促进组织愈合等特点，VEGFR的下游信号为PI3K/AkT，通过调节Bcl-2家族成员的活性，抑制内皮细胞凋亡；抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族成员 caspase3的活化，来达到抑制调亡和促进细胞增殖，增强内皮迁移，进而促进血管生成等生物学功能，使其在心血管、烧伤、肿瘤的防治等各医学领域的广阔应用前景。结合既往研究和生物信息学预测数据库，我们发现Hsa-mir-429和Hsa-mir-455-3p能够与VEGFR-2 mRNA中3’UTR序列结合，从而调控VEGFR-2的表达，但他们的结合对内皮细胞血管生成的影响及分子机制尚未完全探讨。 目的: 本研究旨在结合既往的研究和生物信息学，预测到2种miRNAs能够调控VEGFR-2，通过研究 miRNAs对 VEGFR-2表达影响，探讨其对内皮细胞血管生成影响及机制；从miRN As调控VEGFR-2表达的角度，探讨miRN As对内皮细胞迁移、增殖、凋亡的影响，参与内皮细胞血管生成的调节作用。 方法: 1预测和验证VEG FR-2基因的调控miR N As 首先结合既往对急性心肌梗死病人循环血液 miRNAs芯片基因检测和 Target-Scan(http://www.targetscan.org/)，MiRNAs(http://mirdb.org)，miRBase。Miranda生物信息学数据库预测，我们发现miR-455-3p和miR-429可结合VEGFR-2 mRNA基因，并具有高亲和力。 2合成2种目标miRNA及各自的miRNA inhibitor 我们化学合成了miRNA-455-3p和miR-429双链类似物和单链抑制剂。序列如下：>hsa-miR-455-3p MIMAT000478（5’到3’） GCAGUCCAUGGGCAUAUACAC>hsa-miR-429 MIMAT0001536（5’到3’） UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU 3建立HUVE Cs及转染 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养在人完全Endothelial-SFM细胞培养基，而且添加制造商推荐的所有必要的生长因子和抗生素。所有的细胞都培养在细胞培养箱，保持5％CO2、37?C。细胞用胰蛋白酶消化到达汇合，种植密度在5×104cell/ml，当细胞传代在2-7代、达到80%融合时进行实验。miR-455-3p和miR-429的类似物和抑制剂利用脂质体转染到人脐静脉内皮细胞 实验分为3组：分别为对照组、miRN As组、miRN As+miRN As抑制剂组。 4内皮细胞形态学及各分子生物水平检测及观察 （1）HUVECs增殖率检测； （2）流式细胞术检测HUVEC的凋亡； （3） HUVECs划痕实验； （4） HUVECs细胞血管形成能力实验； （5）应用qPCR检测各组HUVECs细胞VEGFR-2、Bcl-2及AKT mRNA表达情况； （6）应用western blot检测各组HUVECs细胞VEGFR-2及AkT、活化caspase3、Bcl-2蛋白表达情况。 结果: 1．运用MTT法测定两miRN As作用对内皮细胞增殖的影响，miR-429和miR-455-3p抑制人脐静脉内皮细胞增殖； 2.流式细胞仪检测细胞凋亡（Anne xin V法和P I法）。过表达miR-429和miR-455-3p后，脐静脉内皮细胞凋亡显著增加； 3．miR-429和 miR-455-3p抑制 HUVEC迁移能力及血管生成。 4．miR-429和 miR-455-3p可通过影响内皮细胞 VEGFR-2调控 AKT，miR-429和miRN A-455-3p下调 VEGR-2 mRNA及蛋白表达；进而下调AKT mRNA和蛋白表达水平，而miRN A-429及 miRNA-455特异性miRNAs抑制剂则抑制这一过程。 5．内皮细胞转染miR-429和 miR-455-3p类似物48 h后。miRN As上调内皮细胞活化caspase-3蛋白的表达水平，下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。 结论: 1．内皮细胞转染miR-429和miR-455-3p后，抑制细胞增殖及迁移能力，促进细胞凋亡，从而阻碍内皮细胞血管生成。 2．miR-429和miR-455-3p可通过调控VEGFR-2、AKT、Caspase-3、Bcl-2等表达来调节内皮细胞增殖、迁移及凋亡功能，进而影响内皮细胞血管生成。