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我们实验室从不同物种如大鼠、小鼠以及猴中克隆鉴定了一大批附睾特异表达基因，它们在附睾中的表达模式以及功能均不相同。为了研究相关人类基因在附睾中的功能，同时也为了更好的将这些研究过渡到临床实践，本文建立了一个人附睾不同部位、生殖能力形成和衰退相关的基因表达谱数据库。首先检测了人附睾的头、体和尾三个部分的基因表达谱，分析了附睾基因表达的空间分布特点。其次，检测了初生儿、成年人以及老年人三个不同年龄段的人的附睾的基因表达谱。基因表达在新生儿、成年人以及老年人附睾中表达呈现出极大差异。
附睾的基因表达具有明显的时空秩序性。为了更好的理解这些具有时空表达特性的基因在附睾精子成熟过程中参与的作用，我们进一步分析了转录因子和miRNA在附睾中的表达特征，检测了新生儿、成年人以及老年人附睾的miRNA的表达，miRNA在不同年龄人的附睾中的表达呈现很大差异，新生儿附睾中的miRNA表达数量远多于成年人以及老年人。整合并分析基因表达和miRNA表达两个水平的芯片数据，发现miRNA和基因的表达存在负相关性，暗示miRNA在参与调节附睾基因表达的过程中发挥一定作用。
芯片的探针针对已知的miRNA，附睾中的miRNA至今未见报道，为了弥补附睾常被遗忘的遗憾，同时为了深入研究miRNA在调控附睾基因表达中的作用打下基础，我们以大鼠附睾为材料，建立了附睾不同区段的小RNA分子文库，通过测序验证，一共鉴定了32个新的miRNA分子，其中9个为全新的miRNA分子，在其它物种中未见报道，另外23个在小鼠或人中已经被克隆鉴定到，是大鼠的相对应同源物。
microRNA ca-65(miR-ca-65)为其中一个新miRNA分子，它在脾脏、淋巴结、小肠、肺和附睾中表达量很高。miR-ca-65在LPS引起的附睾炎中表达上调，通过脂多糖(1ipopolysaccharides，LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7，miR-ca-65表达也上调，呈现时间以及剂量效应。miRNA模拟物(mimic)能够抑制LPS诱导的促炎因子TNF-α和IL-6分泌，过表达miR-ca-65的前体序列也能抑制两个细胞因子的分泌。反之，miRNA抑制剂(LNA inhibitor)则能加强LPS刺激所引起的TNF-α和IL-6的分泌。证明miR-ca-65参与炎症反应并通过调节TNF-α和IL-6两个细胞因子的分泌来负调节LPS引起的天然免疫反应。经预测，早期生长反应因子(early growth response1，EGR1)是miR-ca-65的一个靶基因，细胞转染实验证明miR-ca-65的模拟物能够减少EGR1的蛋白水平而LNA抑制剂则能上调EGRl的表达。经预测，EGRl的3UTR有三个miR-ca-65可能结合位点，将这个3UTR野生型序列以及三个位点的分别缺失以及全缺失后插入到报告基因中，实验证明三个位点都能被miR-ca-65结合。EGRl是一类转录因子，它能结合到TNF-α的启动子区从而促进TNF-α的转录表达。因此，通过进一步实验我们证明了miR-ca-65负调节LPS引起的TNF-α和IL-6分泌是通过阻遏靶基因EGRl，从而起到负调节LPS引起的天然免疫反应的作用。