益生菌发酵茯苓药渣制备饲料添加剂及其生物活性研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:flycondor
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近些年来,抗生素在畜牧业中得到了广泛应用。与此同时,抗生素滥用现象愈演愈烈,其负面效应日益显著。为此,我国农业农村部宣布实施“禁抗令”。因此,寻找和研发可有效替代抗生素的饲料添加剂已成为目前畜牧业的研究热点。中草药和益生菌因其具有增强免疫、抗氧化、抗菌等作用,成为可靠的抗生素替代品。研究发现,将中草药和益生菌结合,进行生物发酵,发酵后能产生1+1>2的效果。茯苓作为一种可饲用天然植物被收录于我国饲料原料目录,其含有的多糖类和三萜类等成分可增强动物免疫,在饲料添加剂中得到了很好的应用。茯苓也是多种方剂及中成药的原料,有“十方九苓”之说,企业生产量大,因此产生大量废弃茯苓药渣。由于受提取工艺的制约,茯苓药渣中仍含有某些药用及营养活性成分,可将其用作饲料添加剂。研究表明,生物发酵是开发利用中药渣类饲料资源最具潜力的加工技术。本研究以茯苓配方颗粒生产过程中产生的药渣为原料,选择可用于饲料添加剂的益生菌对其进行固态发酵,以期在最低能源消耗和成本投入下制备饲料添加剂,为饲用抗生素的有效替代品研究提供思路;采用相关生物学及细胞实验从抗氧化及免疫调节两方面对发酵后茯苓药渣进行生物活性评价,为其在动物养殖上的开发与应用提供实验依据;同时实现药渣变废为宝,解决中药制药企业处理药渣难题,达到经济和生态效益和谐发展的目的。本文具体研究内容及结果如下:(1)发酵茯苓药渣的菌种筛选及发酵工艺优化选择可用于饲料添加剂的12种益生菌作为发酵菌种,以茯苓药渣作为培养基进行固态发酵。通过活菌计数法分析12种益生菌在茯苓药渣中的生长情况,筛选出最佳发酵菌种。以发酵产物中活菌数为响应值,在单因素实验的基础上,采用响应面优化法对最佳发酵菌种固态发酵茯苓药渣工艺进行研究,优化发酵条件。本研究筛选得到的在茯苓药渣中生长情况最佳的菌种为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)。响应面优化后的最佳发酵工艺为:料水比1:1.45、接种量8%、发酵时间41 h、发酵温度25.5℃。在此条件下发酵产物中活菌数预计为1.29×108CFU/g。经验证,优化结果可靠,该发酵工艺可用于实践。(2)益生菌发酵茯苓药渣的物质分析采用不同的分析测试方法,从药用成分(茯苓多糖、茯苓酸)、营养成分(蛋白质、粗脂肪、粗灰分、粗纤维、磷、钙)、安全卫生指标(重金属、沙门氏菌)三方面对最佳工艺条件下的发酵产物进行物质分析。结果表明,发酵后药用活性成分茯苓多糖含量较发酵前显著下降14.49%,茯苓酸含量较发酵前显著提高9.09%;主要营养成分含量与发酵前相比,蛋白质、粗脂肪、粗灰分、粗纤维、磷、钙分别提高31.90%、131.33%、18.36%、18.81%、50.00%、94.06%,均呈升高趋势,营养价值得到改善。发酵后茯苓药渣中重金属砷、铅、镉与微生物沙门氏菌未检出,重金属汞的含量在安全要求范围内,经过益生菌发酵的茯苓药渣符合饲料安全要求。(3)发酵产物生物活性研究通过三种不同抗氧化指标(DPPH、羟基、ABTS自由基的清除)的测定,比较了茯苓药渣及发酵产物的抗氧化能力。结果表明,茯苓药渣经干酪乳杆菌发酵后,抗氧化能力得到了不同程度的提高。采用CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞增殖能力;中性红法检测细胞吞噬能力;Griess法检测细胞释放一氧化氮(NO)的能力。结果表明,茯苓药渣发酵后比发酵前具有更好的免疫活性,能显著增强巨噬细胞增殖、吞噬及释放NO的能力。综上所述,本研究从可用于饲料添加剂的12种益生菌中筛选出了一种最适合在茯苓药渣中生长的菌种,并确定了最佳发酵工艺;测定了茯苓药渣发酵产物中各药用及营养成分含量,并评价了其安全性;在此基础上探究了茯苓药渣发酵产物的抗氧化及免疫调节活性。本研究为发酵茯苓药渣制备饲料添加剂的开发与应用提供了数据支持,同时为茯苓药渣的资源利用提供了研究思路。
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