【摘 要】
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Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs)是生物体重要的模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs),在抵御病原微生物侵袭过程中发挥着重要的免疫作用。梭鱼(Liza haematocheila)是我国沿海地区重要的经济水产养殖鱼类,为鲻形目(Mugiliformes)鲻科(Mugilidae)代表鱼种。随着梭鱼养殖规模的扩大,关于梭鱼疾
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Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs)是生物体重要的模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs),在抵御病原微生物侵袭过程中发挥着重要的免疫作用。梭鱼(Liza haematocheila)是我国沿海地区重要的经济水产养殖鱼类,为鲻形目(Mugiliformes)鲻科(Mugilidae)代表鱼种。随着梭鱼养殖规模的扩大,关于梭鱼疾病的报道逐年增多。采用免疫学方法预防梭鱼疾病对于梭鱼绿色健康养殖具有重要意义。然而,目前关于包括梭鱼在内的鲻科鱼类的免疫系统的研究几乎呈空白状态。充分地了解梭鱼免疫系统,对于疫苗评价、遗传育种等具有现实意义。本文首先对梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6进行了基因克隆,并对上述基因的序列特征进行了分析。梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6c DNA序列全长分别是:2908 bp、2753 bp、3125 bp、1914 bp和3416 bp;开放阅读框核苷酸序列分别是:2739 bp、2622bp、2871bp、1800 bp和1716bp;推断其编码氨基酸数分别是:913 aa(amino acids)、873 aa、956 aa、599 aa和572 aa;蛋白理论分子量分别是:106.35 k Da、100.59 k Da、109.8 k Da、66.9 k Da和64.76 k Da;预测等电点(p I)分别是:6.28、8.47、4.79、4.89和5.89;脂肪族指数分别是:103.21、91.27、29.60、26.59和64.63;亲水性平均系数(GRAVY)分别是:-0.064、-0.245、0.861、0.915和-0.517;SMART预测结果证明梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6具有典型的、保守的家族结构域;相似性分析结果证明梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6与鱼类的TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6具有较高序列相似性。表明本文所克隆的基因确实为上述基因的同系物。系统进化树分析表明梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6与其他鱼类相关基因聚于一枝,且淡水鱼与海水鱼的相关基因自成一枝,表明上述基因在淡水鱼和海水鱼存在明显的进化分歧。荧光定量PCR检测了梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6在健康梭鱼不同组织中的表达情况。结果表明梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6在所检测的组织中均有表达;进一步,分析了停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)对上述基因的诱导表达情况。结果显示在停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)感染后,梭鱼TLR13、TLR18、TLR22、TAK1和TRAF6的表达水平在不同组织中呈显著上调表达。在本研究以梭鱼为实验对象,首次对其TLR13、TLR18、TLR22以及信号通路相关基因(TAK1和TRAF6)进行克隆和表达分析,阐明对梭鱼TLRs及信号通路基因在细菌感染过程中的表达变化规律。研究结果将对深入了解鱼类TLRs信号通路的免疫功能和机制奠定坚实基础。
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