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胃癌在全球癌症相关死亡中居第二位,是世界上最常见的恶性肿瘤之一,是我国癌症相关死亡的主要原因之一。胃癌起源于胃上皮细胞的表面,胃的每个部位都可能发生癌症,胃窦、幽门和贲门的胃癌发病率最高,胃体的发病率稍低。近些年来,随着手术技术以及内镜技术的发展,越来越多的胃癌病人得到了有效的治疗,其中早期胃癌的5年死亡率逐年降低。然而,由于晚期胃癌的治疗困难,胃癌晚期5年死亡率仍为30%-50%。胃癌的发生是一个复杂的过程,伴随着各种因素不断地发生发展,其中涉及到错综复杂的步骤以及多种编码和非编码基因。因此,探讨胃癌的增殖、生长、迁移、侵袭、凋亡等进展机制具有重要意义。Lnc RNA是一类长度超过200 nt的非编码RNA,没有编码蛋白的能力。根据其位置和方向,lnc RNA可分为内含子lnc RNA、基因间lnc RNA、正义或反义lnc RNA等。在功能上,lnc RNA可以在任何水平上调节基因表达,包括染色质修饰、转录和转录后水平。大量研究发现,lnc RNA在多种疾病和疾病过程中发挥重要作用,包括心血管疾病和癌症的进展。研究表明,非编码RNA在胃癌进展中发挥重要作用。MIR31HG（LOC554202）是近期新发现的lnc RNA,位于9p21.3,长度为2166 bp。最近的研究证实,与正常组织相比,MIR31HG在许多癌症中上调,这些研究表明MIR31HG与多种肿瘤的发生发展相关,据报道,其在多种肿瘤中高表达,可作为不良预后标志物。MIR31HG在胃癌中尚无机制研究,本文着眼于探究MIR31HG对胃癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响,以及对β-catenin的调控机制,以期能为胃癌的临床治疗提供新思路,本文主要实验结果如下:1、MIR31HG促进胃癌细胞的增殖能力我们首先设计了MIR31HG的干涉引物,通过RNA干扰技术在胃癌细胞系MKN45和SGC7901中干涉MIR31HG,我们发现胃癌细胞的形态发生明显的改变,并且细胞增长速率降低,随后我们进行了MTT和Brd U实验,结果显示下调MIR31HG能够抑制MKN45和SGC7901的增殖能力。我们用流式细胞仪检测发现,敲低MIR31HG能够使MKN45和SGC7901细胞的周期阻滞在G0/G1期,我们通过Western blot检测了G0/G1期相关的周期蛋白,发现敲低MIR31HG之后,CDK2、CDK4和cyclin D1蛋白水平下降,而p53蛋白水平则上调。而过表达MIR31HG后,MTT以及Brd U实验验证了胃癌细胞的增殖情况受到了促进,并且周期相关的蛋白CDK2、CDK4和cyclin D1蛋白水平上降,而p53蛋白水平则下调。证明MIR31HG能够影响MKN45和SGC7901细胞的周期,进而影响细胞增殖能力。2、MIR31HG促进胃癌细胞的体内体外成瘤能力。为了探究MIR31HG对胃癌细胞体外成瘤能力的影响,我们进行了软琼脂克隆形成实验,结果证明干涉MIR31HG后,软琼脂中的克隆大小显著减小,数目显著减少。随后进行了小鼠皮下成瘤实验,结果表明,干涉MIR31HG组的小鼠成瘤能力低于对照组。同时Ki67免疫组化实验结果显示,干涉MIR31HG后Ki67的蛋白表达量明显降低,证明MIR31HG能够影响胃癌细胞的体内体外成瘤能力。3、MIR31HG促进胃癌细胞的迁移侵袭能力为了探究MIR31HG对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响,我们进行了划痕实验以及Transwell实验,结果表明,干涉MIR31HG后,胃癌细胞穿过小室的数量显著降低,表明胃癌细胞的迁移侵袭能力显著下降,同时我们检测了迁移侵袭相关蛋白的表达水平,在干涉MIR31HG后,β-catenin、N-cadherin、MMP9、Vimentin、Slug等癌细胞迁移侵袭相关蛋白水平显著下调。过表达MIR31HG后,迁移侵袭相关蛋白有所上调,证明MIR31HG能够影响胃癌细胞迁移侵袭的能力。4、MIR31HG促进β-catenin的稳定性基于以上实验结果,我们发现敲低MIR31HG后,β-catenin及其下游基因cMYC、cyclin D1的蛋白表达水平受到抑制,且在过表达MIR31HG后,它们的蛋白水平有所上调。为了进一步研究MIR31HG与β-catenin之间的关系,我们在过表达MIR31HG的基础上加入Wnt/β-catenin通路抑制剂FH535,Western blot、MTT和transwell实验结果显示,MIR31HG过表达引起的细胞增殖以及迁移侵袭能力都受到了FH535的抑制,说明MIR31HG是通过β-catenin调控胃癌细胞的增殖和迁移侵袭的。随后我们下调MIR31HG后检测β-catenin的RNA定量水平,发现RNA水平并没有显著变化。我们在干涉MIR31HG的基础上加入了MG132发现MG132能够回复MIR31HG干涉引起的β-catenin泛素化。同时,我们进行体外泛素IP试验,结果表明干涉MIR31HG后β-catenin泛素化增加,加入CHX后过表达MIR31HG能够延长β-catenin的半衰期。以上结果表明MIR31HG能够稳定β-catenin。5、MIR31HG通过c-CBL促进β-catenin的稳定性在干涉MIR31HG之后,我们检测了β-catenin的E3连接酶的表达量,发现其中c-CBL的蛋白水平表达量明显上调,但是c-CBL的RNA水平并没有显著上调。我们推测MIR31HG对c-CBL的蛋白水平起作用。为了进一步证明MIR31HG是通过c-CBL来稳定β-catenin的表达,我们在干涉MIR31HG的基础上又干涉了c-CBL,发现β-catenin的表达有所恢复,并且MTT、Transwell实验证明干涉c-CBL后能够恢复MIR31HG下调对胃癌细胞的增殖迁移侵袭的抑制作用。综上所述,本文实验结果表明MIR31HG能够促进胃癌细胞的增殖以及迁移侵袭能力,并且可能是通过c-CBL来促进β-catenin的稳定性,本研究着眼于探究MIR31HG对胃癌细胞的增殖以及迁移侵袭能力以及对β-catenin的调控作用,望能更好的揭示胃癌的的发生发展机制,从而为治疗该疾病的临床治疗提供新策略。