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研究背景:调节性B细胞(Bregs)是一种B细胞亚群,近年来其免疫抑制功能越来越吸引众学者的研究兴趣。在包括炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等很多疾病的小鼠模型研究中,调节性B细胞通过不同机制发挥其免疫抑制作用。此外,在人类自身免疫性疾病观察研究中发现调节性B细胞的改变与一些自身免疫病的疾病进展有关。研究证明调节性B细胞主要通过产生白细胞介素-10(IL-10)发挥抑制免疫应答的作用。Gαq是GNAQ基因编码的异源三聚体G蛋白(G protein)的α亚单位,它广泛表达于哺乳动物细胞中。近40%的G蛋白偶联受体(GPCRs)依赖于Gq家族成员来转导胞外信号。研究证明Gαq在免疫系统中发挥重要作用,对很多免疫细胞具有调控作用。然而Gαq是否对调节性B细胞的免疫调节有调控作用还没有研究明确。研究目的:利用Gnnq基因敲除小鼠研究Gαq对调节性B细胞分化和功能的调控及其可能的分子机制。研究方法:1)通过流式细胞术检测Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中脂多糖(LPS)刺激前后CD19+IL-10+调节性B细胞的比例。通过酶联免疫吸附测定检测两组培养上清中 IL-10的含量。2)分选出Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中的调节性B细胞,分别与野生型小鼠脾脏Naive CD4+ T细胞共培养,通过流式细胞术检测两组CD4+ T细胞增殖,及其分化为调节性T细胞的比例。3)用参与调控IL-10表达的主要信号通路上的信号分子的特异性抑制剂预先处理Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中的B细胞,随后LPS诱导后流式细胞术检测两组CD19+IL-10+调节性B细胞的比例。蛋白质免疫印记法验证两组B细胞在LPS刺激后相关信号分子的磷酸化水平。4)收集类风湿关节炎(RA)患者外周血,分析这些患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞的比例和Gαq mRNA水平的相关性。研究结果:1)在Gnaq基因敲除小鼠中,经LPS诱导后CD19+IL-10+调节性B细胞的分化被抑制。2)Gnaq基因敲除小鼠脾脏调节性B细胞抑制CD4+ T细胞增殖和促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的能力受损。3)PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信号通路分子可能参与了Gαq对调节性B细胞分化的调控。4)类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞比例及Gαq mRNA水平降低,并且两者有显著的相关性。研究结论:本实验发现Gαq对调节性B细胞的分化及免疫抑制功能有调控作用,PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信号通路可能参与了 Gαq对调节性B细胞分化的调控。