EP2受体激动剂Butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞TGF-β3和LIF的影响作用研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenzhuqing
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目的:研究旨在揭示雌激素、前列腺素类化合物、前列腺素受体途径对奶牛输卵管上皮细胞分泌转化生长因子β3(TGF-β3)、白血病抑制因子(LIF)有无协同调控作用。为临床上合理用药治疗奶牛输卵管机能紊乱引起的不孕症并提高奶牛繁殖能力提供理论依据。方法:1)利用胰酶消化法及机械法成功培养奶牛输卵管上皮细胞,第四代细胞为实验用细胞。2)采用荧光定量PCR技术检测(雌激素、butaprost、吲哚美辛)作用不同时间(2h、4h、8h、16h、24h.48h)对奶牛输卵管上皮细胞TGF-β3、LIFmRNA表达的影响。3)分别用不同浓度Butaprost (109-10-5mol/L)和雌激素10-10mol/L作用于奶牛输卵管上皮细胞,然后用荧光定量PCR技术检测TGF-β3、LIFmRNA表达的变化。4)采用Western Blot法检测(雌激素、butaprost、吲哚美辛)对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-β3合成分泌的影响。5)采用ELISA法测奶牛输卵管上皮细胞中LIF的合成分泌。结果:首先,体外成功培养了奶牛输卵管上皮细胞。其次,雌激素作用16、24和48h时对奶牛输卵管上皮细胞TGF-β3的表达量与空白组相比均极显著(P<0.01)升高,4h的表达量显著性的降低(P<0.05):且EP:受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGF-β3的效应。加入吲哚美辛后能有效的抑制内源性前列腺素对TGF-β3表达的作用。雌激素(无吲哚美辛预处理)作用2h对奶牛输卵管上皮细胞LIF的表达量与空白组相比极显著性升高(P<0.01),且2h时LIFmRNA的表达量达到最大值。吲哚美辛预处理后,LIF mRNA的表达量与无吲哚美辛处理组相比均升高。第三,用不同浓度的butaprost刺激奶牛输卵管上皮细胞后,TGF-β3、LIFmRNA表达量且呈现浓度依赖性。第四,Western Blot检测TGF-β3的表达与TGF-β3mRNA检测结果基本一致。第五,ELISA检测奶牛输卵管上皮细胞中LIF的结果与LIFmRNA检测结果相符。结论:1雌激素能够促进奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子TGF-β3, LIF mRNA的表达。2雌激素和EP2受体激动剂Butaprost对奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子TGF-β 3 mRNA的表达有协同调控作用,对奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子LIF mRNA的表达有拮抗作用。3内源性前列腺素对奶牛输卵管上皮细胞细胞因子TGF-β3 mRNA的表达有促进作用,对LIF mRNA的表达有抑制作用。
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