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冰川棘豆(Oxytropis.glacialis)是疯草的一种,主要生长在西藏阿里地区,是对牧区危害最严重的毒草之一。2,2,6,6-四甲基哌啶酮(TMPD)是从冰川棘豆地上部分提取、分离出来的一种主要毒性生物碱。冰川棘豆虽为毒草,但其营养价值很高,如能去毒合理利用,变废为宝,将会取得很好的经济效益。本研究基于前期应用微生物降解冰川棘豆毒素的研究,通过形态学观察和生理生化特征测定,结合16S rDNA序列同源性及系统发育的分析,确定3株TMPD降解菌的种属。1 LF-1菌株的菌体呈杆状,0.5～0.9×1.0～2.0μm,革兰氏染色阴性,单个、成对和不规则堆状存在,有荚膜,无芽孢,无运动性;菌落呈圆形,表面光滑,湿润,隆起,边缘整齐,灰白色,半透明;葡萄糖发酵产酸产气,兼性厌氧,产生吲哚,M.R.试验阳性,V-P试验不稳定,还原硝酸盐,能利用柠檬酸盐和丙二酸盐,不产生H2S,不液化明胶,接触酶阳性,氧化酶阴性,脲酶阳性,三糖铁上斜面和底层均为黄色,并产气,麦康凯平板上的菌落呈现粉红色。通过16S rDNA序列同源性及系统发育分析,LF-1菌株的遗传进化距离与克雷伯氏杆菌属最近,它与产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)同处于一个最小的分支,与已知菌株Klebsiella oxytoca isolate DR.Y14(DQ226215)的同源性达到99.52%。综合以上结果,鉴定LF-1菌株为产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)。2 LF-2菌株的菌体为球状,0.8～1.0μm,革兰氏染色阳性,单个、成对和不规则堆状存在,无荚膜,无芽孢,无运动性;菌落呈圆形,表面光滑,湿润,隆起,边缘整齐,灰白色,半透明;葡萄糖发酵产酸不产气,兼性厌氧,不产生吲哚,M.R.试验阳性,V-P试验阴性,水解淀粉,还原硝酸盐,接触酶阳性,氧化酶阴性,脲酶阳性,凝固酶阴性,在5%NaCl和7%NaCl中生长。通过16S rDNA序列同源性及系统发育分析,LF-2菌株的遗传进化距离与葡萄球菌属最近,与巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri)同处于一个最小的分支,与已知菌株Staphylococcus pasteuri(AJ717376)的同源性达到99.80%。综合以上结果,鉴定LF-2菌株为巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri)。3 LF-3菌株的菌体呈杆状,1.0～1.2×1.5～5.0μm,革兰氏染色阴性,单个、成对和不规则堆状存在,无荚膜,有芽孢,芽孢椭圆形或柱形,中生或偏中生,孢囊不膨大,有运动性;菌落呈菌丝体状,直径为0.5～4cm,表面不光滑,干燥,平升状,表面有同心圆,边缘不整齐,呈锯齿状,灰白色,半透明;葡萄糖发酵产少量酸,厌氧条件下不生长,不产生吲哚,M.R.试验阴性,V-P试验阴性,水解淀粉,不还原硝酸盐,不能利用柠檬酸盐和丙二酸盐,不产生H2S,液化明胶,接触酶阳性,氧化酶阴性,脲酶阴性,在5%NaCl和7%NaCl中生长,50℃时不生长。通过16S rDNA序列同源性及系统发育分析,LF-3菌株的遗传进化距离与芽孢杆菌属最近,它与弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus)同处于一个最小的分支,与已知菌株Bacillus flexus(DQ837542)的同源性达到99.80%。综合以上结果,鉴定LF-3菌株为弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus)。