论文部分内容阅读
研究背景：KCNQ基因编码的钾离子通道KV7家族成员广泛表达于神经元中。在神经系统，KCNQ通道的主要作用是控制神经元的兴奋性，对神经元的重复发放或者簇状发放有着深刻的影响。现在的研究已经表明KCNQ通道在发生功能性缺陷的时候会引发多种神经疾病包括癫痫，心率失常和耳聋。然而，目前关于该通道在寡突胶质谱系细胞中是否有表达以及他们在寡突胶质谱系细胞中的功能还不清楚。研究方法与结果：在本研究中，我们运用RT-PCR，免疫化学以及电生理的方法研究KCNQ通道在寡突胶质谱系细胞中的表达情况以及其功能。研究结果显示KCNQ2-5四种亚型的mRNA在寡突胶质前体细胞中都可被检测到。在寡突胶质细胞逐渐分化成熟的过程中KCNQ2,3,5三个亚型的mRNA表达发生下调。同时在原代培养以及脑组织切片的寡突胶质前体细胞中也检测了有KCNQ通道蛋白的表达。电生理实验表明M电流的特异性抑制剂XE991能够明显的抑制寡突胶质前体细胞中的KCNQ通道电流，但对已经发生分化的寡突胶质细胞中的电流并没有作用。另外，我们的研究还发现在体外抑制KCNQ通道可以促进寡突胶质前体细胞的迁移。结论：这些研究结果表明KCNQ通道在寡突胶质谱系细胞中有功能性的表达，提示其在生理或者病理情况下可能对寡突胶质前体细胞存在功能性的影响。1995年，P2X3受体从大鼠背根神经节中被克隆出来。相对于P2X家族其他成员在成年动物中枢神经系统中的广泛分布，P2X3受体的表达十分局限。在成年动物，P2X3受体的mRNA只存在于背根神经节、三叉神经节和结状神经节的感觉神经元中，并且主要分布在这些神经节内中小直径的A和C两类纤维感觉神经元中。P2X3受体这种特殊且局限性的分布提示P2X3受体在伤害性感受的传递中可能起重要的作用。目前对P2X3受体的调节的认识尚处在较为初级的阶段。Pirt是最近新发现的存在于外周神经系统中的一种膜蛋白分子。目前的研究认为，Pirt以PIP2依赖的方式促进TRPV1通道的活性。Pirt基因敲除后的小鼠表现出对伤害性刺激的反应减弱。Pirt分子与P2X3受体在时间上和空间上存在高度一致性，提示Pirt分子有可能通过影响调控伤害性感觉神经元中的P2X3受体，参与调节P2X3受体介导的伤害性信息的传递。本研究运用分子生物学，细胞生物学，生物化学以及电生理等实验技术获得的研究结果表明，在外源表达系统中Pirt分子通过其胞内N端的前13个氨基酸残基对,β-甲基-ATP诱导的P2X3受体电流有较强的抑制作用。免疫共沉淀实验显示Pirt分子与P2X3受体存在相互作用。另外，Pirt分子不影响P2X3受体在细胞膜上的表达，提示Pirt分子有可能是通过与P2X3受体结合改变受体自身的特性从而抑制P2X3受体电流。