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目的：研究电压门控钙离子通道Cav3.1在血管平滑肌细胞增殖中的作用,并初步探讨其引起血管平滑肌细胞增殖的机制。方法：1.以分离的大鼠胸主动脉中层细胞为研究对象,对该原代细胞进行细胞类型鉴定。利用Western blot方法观察原代细胞中α-平滑肌actin的表达。2.应用免疫荧光的方法对分离培养的原代细胞进行α-平滑肌actin荧光染色和细胞核染色。通过计数α-平滑肌actin和细胞核同时着色的细胞个数,对分离的原代细胞进行纯度鉴定。3.构建Cav3.1主要功能亚基α1G的腺病毒载体,以a1G腺病毒载体感染大鼠胸主动脉平滑肌细胞。应用MTS法观察过表达α1G对大鼠胸主动脉平滑肌增殖的影响。4.利用T-type钙离子通道抑制剂,作用于过表达α1G的大鼠胸主动脉平滑肌细胞。利用MTS法观察T-type钙离子通道抑制剂对过表达α1G的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。5.分别利用PKC抑制剂、Pyk2抑制剂,作用于过表达α1G的大鼠胸主动脉平滑肌细胞。利用MTS法观察PKC抑制剂、Pyk2抑制剂对过表达a1G的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。6.用Western blot方法观察,过表达α1G对大鼠胸主动脉平滑肌细胞中Pyk2磷酸化的影响。结果：1. Western Blot结果表明,分离的原代细胞高表达α-平滑肌actin,而同种属的动物骨骼肌和心肌组织中没有检测到α-平滑肌actin的表达。因此,分离的原代细胞是血管平滑肌细胞。2.免疫荧光染色的结果显示,肌丝蛋白α-平滑肌actin和细胞核同时着色的细胞占总细胞的95%以上,表明分离得到的大鼠胸主动脉平滑肌细胞是纯度较高的原代细胞。3.在大鼠胸主动脉平滑肌细胞中过表达Cav3.1通道蛋白可以引起细胞的增殖。MTS检测结果表明,αlG组可以促进大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖,与GFP对照组和正常对照组相比,校正OD值有显著性差异(P<0.05),相对增殖率为145.44%。4.T-type通道抑制剂可以抑制Cav3.1引起的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖。用浓度为3μM的T-type通道抑制剂作用于过表达Cav3.1的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,可以将细胞的生长抑制到正常细胞水平。实验组(alG+T-blocker)与对照组(α1G)相对增殖率相比,有显著性差异(P<0.05)。同浓度的T-type钙离子通道抑制剂对于腺病毒空载组(GFP对照)及正常细胞组(5%FBS对照)的生长无明显抑制作用(P>0.05)。5.不同浓度的PKC抑制剂对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的体外增殖无明显抑制作用。Pyk2抑制剂作用于过表达Cav3.1通道蛋白的大鼠胸主动脉平滑肌细胞72hrs,可以将细胞的生长抑制到正常细胞水平。实验组(alG+Pyk2抑制剂)与对照组(α1G)相对增殖率相比,有显著性差异(P<0.05)。同浓度的Pyk2抑制剂对于腺病毒空载组(GFP对照)及正常细胞组(5%FBS对照)的生长无明显抑制作用(P>0.05)。6.Western blot结果显示,过表达α1G大鼠胸主动脉平滑肌细胞中,活化的Pyk2(Tyr402位点磷酸化)水平升高。结论：在大鼠胸主动脉平滑肌细胞中过表达Cav3.1可以引起细胞的增殖,该增殖的机制可能与增殖性钙信号沿受Pyk2调控的信号通路传递有关。