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目的：1.本课题以IL-33作为主要研究对象，研究其在β-淀粉样蛋白（Aβ）刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性。2.初步探明IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制。方法：1. IL-33在β-淀粉样蛋白刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性研究采用MTT法检测不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞后不同时间点的细胞存活率，观察其对视网膜色素上皮细胞损伤的影响。提取不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞24h后细胞RNA，采用定量PCR检测IL-33mRNA水平；收集细胞培养上清，ELISA检测IL-33蛋白表达；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信号通路抑制剂后，采用定量PCR及ELISA检测0.3μMAβ1-40刺激D407细胞24h后IL-33mRNA及蛋白水平表达，鉴定β-淀粉样蛋白刺激视网膜色素上皮细胞后调控产生IL-33的信号通路。2. IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制研究采用定量PCR检测不同浓度的IL-33刺激D407细胞16h后其受体ST2LmRNA表达情况，流式细胞术检测100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后细胞表面受体ST2L表达；不同浓度的IL-33刺激D407细胞16h后，收集细胞及培养上清，定量PCR和ELISA检测炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA和蛋白表达，探讨IL-33因子对D407细胞的作用机制；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信号通路抑制剂后，采用定量PCR及ELISA检测100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后上述炎症因子的表达，鉴定调控产生炎症因子的信号通路。结果：1. IL-33在β-淀粉样蛋白刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性研究1.10.3μM Aβ1-40刺激组较正常组细胞形态变圆，胞体肿胀，细胞排列数量减少，细胞间间隙增加，且随Aβ1-40刺激浓度增加变化明显，而小于0.3μM Aβ1-40刺激组细胞形态无明显变化。MTT检测结果表明：随着Aβ1-40刺激浓度的增加，细胞存活率逐渐下降，除了0.001μMAβ1-40刺激组外，其余各刺激组与正常对照组相比细胞存活率均显著降低(P <0.05)。随着0.3μM和1μM Aβ1-40刺激D407细胞时间的延长，细胞存活率也逐渐下降，且与对照组相比均有显著性差异(P <0.05)。1.2不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞后，IL-33mRNA及蛋白表达水平均增加，且在0.3μM刺激浓度时表达显著增加(P <0.05)。结果提示：Aβ1-40刺激D407细胞后能够引起IL-33表达上调。1.3加入ERK1/2和p38MAPK信号通路抑制剂，0.3μM Aβ1-40刺激D407细胞24h后，IL-33mRNA表达水平显著降低(P <0.05)，但只有加入ERK1/2信号通路抑制剂后，细胞培养上清IL-33蛋白水平才有明显下降(P <0.05)。结果提示：Aβ1-40刺激D407细胞后，IL-33的产生主要是通过ERK1/2信号通路调控，而p38MAPK信号通路仅参与了IL-33转录水平的调控。2. IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制研究2.1IL-33因子刺激D407细胞后，ST2L mRNA表达显著增加(P <0.05)，并随着IL-33刺激浓度的增加而增加，且在100ng/ml IL-33刺激时表达量最高。采用流式细胞术检测D407细胞表面受体表达结果显示：D407细胞表面ST2L表达阳性，且在100ng/ml IL-33因子刺激细胞16h后表达上调。2.2采用定量PCR及ELISA检测IL-33因子刺激D407细胞后炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA及蛋白水平表达。结果显示：20，50，100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后，炎症因子mRNA及蛋白水平表达均显著增加(P <0.05)，且随着IL-33因子刺激浓度的增加，炎症因子表达均逐渐增加，并在100ng/mlIL-33刺激时表达量最高。结果提示：IL-33刺激D407细胞后IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α因子表达上调。2.3加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信号通路抑制剂，100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后，定量PCR和ELISA检测炎症因子mRNA及蛋白水平表达，结果显示：加入p38MAPK信号通路抑制剂后，IL-6表达显著下降；加入ERK1/2信号通路抑制剂后，IL-8表达显著下降；加入NF-κB信号通路抑制剂后，IL-1β表达显著下降；而加入JNK信号通路抑制剂后，TNF-α表达显著下降(P <0.05)。结果表明：IL-33因子刺激D407细胞后炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的产生是分别通过p38MAPK，ERK1/2，NF-κB以及JNK信号通路调控。结论：1.随着Aβ1-40刺激浓度的增加和时间的延长，人视网膜色素上皮细胞存活率逐渐下降。2. β-淀粉样蛋白1-40刺激人视网膜色素上皮细胞后能够诱导IL-33因子转录及蛋白水平表达上调，且IL-33的产生主要是通过ERK1/2信号通路调控，而p38MAPK信号通路仅参与了IL-33转录水平的调控。3.人视网膜色素上皮细胞表面表达ST2L受体且随着IL-33因子刺激浓度的增加ST2L表达量增加。4. IL-33刺激人视网膜色素上皮细胞后能够上调炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表达。5.在人视网膜色素上皮细胞中，IL-33因子分别通过p38MAPK，ERK1/2，NF-κB，JNK信号通路调控炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表达。