基于血清质谱数据非依赖性采集谱图库的建立及应用

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生物大分子蛋白质具有许多功能,在生命活动中发挥重要作用。蛋白质组是指一种细胞、乃至一种生物的基因组所表达的全部蛋白质。蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体蛋白质组成和变化规律的科学。蛋白质组学可通过生理和病理状态的比较,发现差异表达蛋白、筛选和鉴定有价值的生物标志物在癌症、自身免疫性疾病和传染病的诊断、发展、危险评价、疾病分期分型、治疗以及疗效监测等方面发挥重要的作用,极大地促进精准医学的研究。基于液质联用的高通量蛋白质组学在蛋白质定性,定量方面得到广泛的应用。近几年发展起来的数据非依赖采集模式融合了数据依赖性采集高通量和绝对定量金标准选择反应监测、平行反应监测定量精确的优点。同时数据非依赖性采集还具有重复性好、操作简单周期短的优势。为了获得最佳性能,需要构建基于目标肽段离子碎片的谱图库。为此,通过样本预处理、混合,胰酶酶解、液相色谱收集馏分、原始文件采集、建立一个高质量的人类血清质谱谱图库对于蛋白鉴定覆盖深度、定量准确性具有重要意义。特应性皮炎是一种慢性、复发性、炎症性皮肤病。现有诊断标准不一,缺少客观的实验室诊断指标;在病情严重程度评价方面主观性强,缺少反映病情严重程度的客观指标;疾病的异质性大,未能实现基于生物标志物的个体化治疗。本研究采用液相色谱-质谱联用技术,运用数据非依赖性采集方法检测特应性皮炎患者血清中表达的蛋白质,寻找疾病特异性表达的蛋白质分子、反映病情严重程度的客观指标、以及中药培土清心颗粒疗效预测的生物标志物。筛选出30个潜在的诊断性生物标志物,其中17个上升,13个下降。LTA4H、IGLV3-21蛋白水平与病情严重度EASI呈显著正相关;LTA4H、ALAD水平与病情严重程度SCORAD呈显著正相关。培土清心颗粒治疗前后共鉴定出11个差异性蛋白,其中7个上升,4个下降。这些潜在的生物标志物可以揭示疾病的发病机制或者作为潜在的药物治疗靶点,尚需要进一步扩大样本进行验证。该研究可为特应性皮炎的诊断提供实验室指标,为病情严重程度提供客观评价指标,为中药培土清心颗粒筛选出潜在的治疗人群,有助于实现药物的精准治疗。
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