【摘 要】
：
牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）是在世界范围内造成养牛业巨大经济损失的重要病原之一。为了快速检测BVDV和区分BVDV的不同基因型,本试验根据GenBank中BVDV三种基因型的5’端非翻译区,分别设计特异性引物和探针,通过对引物、探针及退火温度的优化,建立BVDV基因分型三重RT-PCR方法、BVDV基因分型三重纳米RT-PCR方法和BVDV基
【基金项目】
：
内蒙古自治区科技重大专项（2020ZD0006）；
论文部分内容阅读
牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）是在世界范围内造成养牛业巨大经济损失的重要病原之一。为了快速检测BVDV和区分BVDV的不同基因型,本试验根据GenBank中BVDV三种基因型的5’端非翻译区,分别设计特异性引物和探针,通过对引物、探针及退火温度的优化,建立BVDV基因分型三重RT-PCR方法、BVDV基因分型三重纳米RT-PCR方法和BVDV基因分型三重荧光定量RT-PCR方法,并对呼和浩特地区部分牛场进行BVDV分子流行病学调查。结果表明,建立的BVDV基因分型的三种方法从多种致牛腹泻和呼吸系统疾病的病原中都只检测到BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3核酸,表明三种检测方法都具有良好的特异性。在BVDV基因分型的三种诊断方法中普通RT-PCR可同时检测到BVDV-1、BVDV-2 和 BVDV-3 的最低核酸量分别为 1×102copies/μL、1× 102copies/μL和 1× 103 copies/μL;纳米 RT-PCR 可同时检测到 BVDV-1、BVDV-2 和 BVDV-3 的最低核酸量均为1× 102 copies/μL,而荧光定量RT-PCR可同时检测到BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3 的最低核酸量分别为 1×101 copies/μL、1×102copies/μL 和 1× 101copies/μL,表明三种方法均有较高的敏感性。三种诊断方法中普通RT-PCR和纳米PCR都重复扩增出了与目的条带大小一致的目的片段,荧光定量RT-PCR方法的组内变异系数和组间变异系数均小于2%,表明三种诊断方法都具有良好的重复性。应用BVDV基因分型三重荧光定量RT-PCR方法对呼和浩特地区的犊牛和奶牛238份样品进行检测,对部分阳性样品BVDV的5’UTR进行遗传进化分析。结果显示,阳性48份（检出率为20.16%）;其中BVDV-1 阳性为46份,BVDV-2阳性为2份。在呼和浩特地区主要流行BVDV-1的亚型有BVDV-1a、BVDV-1b和BVDV-1c;检测到的2株BVDV-2的亚型为BVDV-2a。本研究为快速检测BVDV及不同基因型提供了不同的手段,可用于BVDV分子流行病学调查和牛病毒性腹泻的快速诊断,流行病学调查结果为综合防控措施的制订提供参考依据。
其他文献
本研究以锡林郭勒盟阿巴嘎黑马鲜马奶及发酵过程中酸马奶（共13个）为研究对象,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱技术探究关键风味物质的变化规律,采用高通量测序技术研究微生物动态演替规律。在此基础上,探究微生物群落结构与风味成分变化的相关性。结论如下:（1）挥发性风味物质变化规律研究。共检测到52种挥发性风味物质,包括19种酸类、17种酯类和7种醇类等。基于香气活力值（OAV）分析发现,对
乳酸菌胞外多糖作为天然绿色的增稠剂、乳化剂和稳定剂等,可改善乳制品的品质和口感,是目前乳制品研究领域的热点之一。本文以分离自传统发酵乳制品中的Streptococcus thermophilus IMAU 20561为研究对象,对其在不同氮源培养基中的表型特征进行研究,并结合基因组学和转录组学探讨其在不同生长时期与胞外多糖生物合成相关的基因表达量差异,主要研究结果如下:1.S.thermophil
黄河（内蒙古段）在每年的冬季至春季都会经历一个冻结-融化的过程,是典型的季节性冻土区。河道两侧堤岸土层整体可归属为第四季松散河流堆积物,在每年反复经受季节性冻结-融化的作用过程之后,堤岸土体间的颗粒结构、力学性质以及强度特性等都会发生较大改变,而这些土体结构的微观变化加之汛期河流对岸坡的冲刷,往往会加速堤岸边坡的破坏,从而触发河岸崩塌,造成河床的抬高,威胁堤外人民的生命和财产安全。因此基于冻融过程
本研究以营造不同的贮藏环境、研究贮藏环境对贮藏过程中有益物质有害物质产生的影响!低O2高CO2的气氛组成与之有什么关联为目的;采用熔融共混的方式制备出可控自发气调的可降解包装材料,以聚乳酸（PLLA）为基材,添加聚丁二酸丁二醇酯（PBS）、聚己内酯（PCL）和聚对苯二甲酸己二酸丁二醇酯（PBAT）制备共混薄膜,通过测定贮藏期间包装内的气体浓度、感官评定、草莓的失重率、可溶性固形物、总酚和黄酮含量等
乌兹别克斯坦是位于中亚中部的一个多民族国家,传统发酵乳制品是当地居民饮食结构中非常重要的组成部分。为了了解乌兹别克斯坦传统发酵乳制品中的乳酸菌组成及细菌多样性,采集了当地自然发酵的酸牛乳和酸马乳样品,经纯培养方法与PacBio SMRT测序技术对这些样品的菌群结构进行分析。其研究结果如下:1.在乌兹别克斯坦两个地点共采集了31份自然发酵乳样品,其中大多数样品的乳酸菌活菌数在107CFU/m L以上
土壤盐碱化已成为全球人类面临的资源环境问题,内蒙古河套灌区杭锦后旗为代表的农用地盐渍化严重,淡水资源短缺,严重制约灌区内农业可持续发展进程。目前,“滴灌+沙穴”是一种新型改良盐碱土的种植结构模式,对龟裂盐碱土具有较好的改良效果,而对河套灌区内不同土壤质地、不同矿化度微咸水灌溉的适用改良技术及可实施性有待进一步商榷。因此,本文以河套灌区杭锦后旗代表性盐渍土壤为研究对象,设置“滴灌+沙穴”结构为前提条
降水与气温关系的演变会对水资源、生态环境等方面造成影响,但目前仍未能在大区域内全面、系统地揭示降水与气温关系的时空变异性,亦存在植被对降水与气温关系的响应不明确等问题。中国北方地区幅员辽阔,涵盖气候类型多,地形地貌复杂多样,在响应全球气候变化方面具有代表性,揭示中国北方地区降水与气温关系的时空变异性及植被对降水与气温关系的响应对于在中国北方,乃至全球范围内深入解气候变化、应对水资源问题和改善生态环
HARBI1蛋白属于DDE＿Tnp＿4家族蛋白,完全由约四亿五千万年前脊椎动物的共同祖先（硬骨鱼纲）中活跃的Harbinger转座酶衍化而来,HARBI1基因是迄今唯一与已知的Harbinger转座元件同源的脊椎动物基因。与HARBI1同源性最高的蛋白质由一个自主的Harbinger3＿DR转座子编码的,Harbinger3＿DR衍生的非自主转座子对一个17bp的回文目标位点有着显著的偏好,这在其
为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP5和M蛋白对外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）激活功能。以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5和M基因片段,克隆至原核表达载体p ET-32a（+）,构建重组质粒p ET-32a-GP5和p ET-32a-M,经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）
作为地球上最丰富的可再生能源之一,植物生物质主要由木质纤维素组成。木质纤维素是由半纤维素、木质素、和纤维素组成的复杂异质复合物。在工业上,纤维素作为原料可以降解为纤维二糖,并广泛应用于生物燃料、食品、和环境保护等产业。如何低成本、高效地降解纤维素生产葡萄糖是该技术的主要瓶颈。目前,降解纤维素的主要方法是生物酶法。主要涉及三种不同酶:内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、和β-葡萄糖苷酶的协同作用。纤维素的