【摘 要】
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研究目的:本研究旨在通过基因芯片筛选出在巨噬细胞极化过程中差异性表达的关键circRNA分子,并探究该差异性circRNA分子在巨噬细胞极化过程中的相关分子机制。研究方法:首先本课题组在体外成功分离培养小鼠骨髓来源巨噬细胞（Bone marrow derived macrophage.BMDMs）,此细胞作为本实验的研究对象并将其称之为M0型巨噬细胞。将M0型巨噬细胞通过LPS以及IFN-γ刺激4
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研究目的:本研究旨在通过基因芯片筛选出在巨噬细胞极化过程中差异性表达的关键circRNA分子,并探究该差异性circRNA分子在巨噬细胞极化过程中的相关分子机制。研究方法:首先本课题组在体外成功分离培养小鼠骨髓来源巨噬细胞（Bone marrow derived macrophage.BMDMs）,此细胞作为本实验的研究对象并将其称之为M0型巨噬细胞。将M0型巨噬细胞通过LPS以及IFN-γ刺激48 h可以将其诱导成M1型巨噬细胞,用IL-4刺激48 h可以将其诱导成M2型巨噬细胞,qRT-PCR验证体外极化模型建立成功。通过基因芯片以及qRT-PCR筛选验证在巨噬细胞极化过程中差异表达的circRNA分子,将其在BMDMs中敲低后,观察其敲低后对巨噬细胞极化的影响及其下游miRNA的变化。同时在巨噬细胞中将miRNA敲低和过表达后,验证miRNA在巨噬细胞极化过程中的作用。并通过multi MiR数据库对circRNA与miRNA所调控的m RNA进行搜索与预测,由于预测结果过多,我们选择了已被实验验证的靶关系（miRecords/miRTar Base/Tar Base收录的关系）用于后续分析。最后通过Western blotting初步探究了circRNA调控巨噬细胞极化过程中其可能的分子机制。研究结果:在巨噬细胞极化过程中差异性表达的circRNA分子主要有circ0001288、circ0000115、circ0000011以及cir0000474,均在M2型巨噬细胞中高表达,其中circ0000474在M2型巨噬细胞中差异性高表达较为明显且其实验结果比较稳定,因此后续实验以circ0000474作为研究对象。在M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化过程中,circ0000474表达显著升高,在M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化过程中circ0000474表达降低。进一步研究发现,敲低circ0000474促进了巨噬细胞M1表型,抑制了巨噬细胞M2表型。通过生物信息学分析发现,miR-31-5p、miR-410-3p、miR-711以及miR-712-3p可能作为circ0000474的作用靶点,其中miR-31-5p实验结果比较稳定且符合趋势。miR-31-5p在M1型巨噬细胞中高表达,且在巨噬细胞表型从M1向M2转变过程中miR-31-5p的表达降低,在巨噬细胞表型从M2向M1转变过程中miR-31-5p的表达升高。通过生物信息学对circ0000474和miR-31-5p的靶基因进行功能富集分析,发现circ0000474和miR-31-5p可能通过调控NF-κB信号通路影响巨噬细胞极化。在M2型巨噬细胞中抑制circ0000474表达,NF-κB信号通路中IKK以及p65的磷酸化水平显著升高。研究结论:circ0000474/miR-31-5p轴通过NF-κB信号通路调控巨噬细胞的极化。
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