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瘤背石磺(Onchidium struma)隶属于软体动物门(Mollusea)、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)、柄眼目(Stylommatophora)、石磺科(Onchidiidae)。通过野外采集不同体重石磺成体,解剖出性腺利用常规石蜡组织切片方法制片系统研究瘤背石磺的性腺发育规律及卵子与精子的发生过程;通过对产卵前后的瘤背石磺的生殖腺的组织切片方法进一步明确瘤背石磺的独特的生殖方式;利用活体和组织切片相结合的方法,系统阐释了瘤背石磺胚胎及幼体的发育规律,尤其是内部器官的变化过程;同时在实验室条件下初步筛选出适合瘤背石磺幼体生长和存活的饵料。
1、瘤背石磺性腺发育规律``利用组织学方法研究了瘤背石磺体重(2-28 g)与性腺发育、性腺指数与肝胰腺指数或粘液腺指数间的关系,不同体重瘤背石磺性腺内各期生殖细胞的组成与比例以及瘤背石磺卵子和精子发生的规律。结果表明:
(1)瘤背石磺的性腺指数有随体重增加而增加的特点:10 g以上个体性腺指数达到最高且基本无变化;不同体重瘤背石磺性腺指数与肝胰腺指数和粘液腺指数有明显的正相关性(P<0.05);
(2)6 g以下组的瘤背石磺性腺滤泡管内未发现有雌性生殖细胞,6 g以上组的性腺滤泡管内雄性与雌性生殖细胞并存;
(3)所有瘤背石磺个体性腺内均有精子分布,6 g以下个体雄性生殖细胞组成以次级精母细胞为主,而6 g以上个体则以精子为主;6 g以上组的雌性生殖细胞成熟程度随体重增加有明显增加,其中6-8 g以卵原细胞为主(57%),8_10 g开始出现外源性卵黄合成期的卵母细胞,10-14 g时的外源性卵黄合成期的卵母细胞约为69%,且开始出现成熟卵母细胞。
(4)卵子发生共经历6期:分别为卵原细胞期、卵黄合成前卵母细胞期、内源性卵黄合成期、外源性卵黄合成期、近成熟期和成熟卵母细胞期,成熟卵母细胞直径约为(59.36±3.88)μm。精子发生经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子共5个阶段,精子长约(52.44±20.65)μm。石磺体重与性腺发育程度密切相关,10 g以上的个体可做为亲本使用。
2、瘤背石磺产卵前后生殖腺的组织学的变化对瘤背石磺纳精囊、受精囊以及产卵前后两性腺、蛋白腺以及粘液腺的进行组织学观察。同时发现并比较排出体外卵荚的活体及组织切片形态。结果发现:
(1)纳精囊中储存有大量成熟精子,其作用应为当瘤背石磺个体较小并产生精子时储存精子,待卵子成熟后再与其受精。
(2)瘤背石磺产卵后两性腺中部腺泡排空,剩余少量处于小生长期的卵细胞。而位于两性腺边缘的腺泡则了充满了处于大生长期的卵细胞,且腺泡形态饱满致密。推测腺泡的发育应为有边缘向中央迁移,当中央腺泡卵细胞被排除后,周围的腺泡向中央推进,其中卵细胞迅速生长成为成熟卵子,为下次排卵做准备。
(3)瘤背石磺粘液腺中含有大量嗜碱性物质,与排出体外的卵荚中的卵周液类似。粘液腺由嗜酸性和嗜碱性两种区域组成,含有大量分泌细胞。
(4)推测瘤背石磺的生殖过程为:雄性生殖细胞成熟后储存在纳精囊中。当两性腺中卵细胞成熟后,通过输卵管排入受精囊,然后进行交配行为。同时,大量的卵蛋白液进入受精囊,包裹受精卵,经过粘液腺的分泌的粘液再次包裹后形成卵荚并粘结成卵块后发生产卵行为。
3、瘤背石磺胚胎和幼体发育在水温27~29℃、气温27~31℃和海水盐度为16的环境条件下人工孵化瘤背石磺的卵块。对胚胎和幼体进行活体显微拍照和组织学研究。结果表明:根据早期发育的形态变化将其划分为胚胎发育和幼虫发育两个阶段。瘤背石磺的胚胎发育具备典型的不等全裂、螺旋卵裂特征。组织切片可明显观察到卵周液的存在。瘤背石磺幼虫为典型的腹足纲面盘幼虫形态;活体可观察到明显的卵黄囊。可发现卵黄囊在孵化后的0-7天显著缩小.组织切片可发现,瘤背石磺幼体消化道发育十分迅速,可观察到明显的食道、胃及消化腺。证明出膜的幼虫已具有消化吸收的能力。可见瘤背石磺的幼体的早期发育是混合性营养。
4、不同饵料及配伍对瘤背石磺幼体的影响``利用六种饵料及配伍A微绿球藻(Nannochl orisoculat):B绿色巴夫藻(Pavlova viridis);C球等鞭金藻(Isochrysis galbana);D微绿球藻+绿色巴夫藻(N.orisoculata+P.viridis):E绿色巴夫藻+球等鞭金藻(P.viridis+L galbana);F微绿球藻+球等鞭金藻(N.orisoculata+I.galbana);微绿球藻+球等鞭金藻的配伍对于石磺幼体的存活最具积极的作用。这两种藻类DHA、EPA含量的互补为瘤背石磺幼体发育提供了积极的意义。