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基于本课题前期关于以PSCA(Prostate stem cell antigen, PSCA)为靶点的前列腺癌治疗性DNA疫苗的研究结果,本研究拟选取人源的热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)作为佐剂分子,构建用于前列腺癌治疗用的重组亚单位疫苗及重组腺病毒载体疫苗,期望能够利用HSP70分子的佐剂功能和分子伴侣功能增强PSCA蛋白的可溶性和免疫后机体的免疫水平;同时基于“prime-boost”免疫策略的考虑,希望不同疫苗的联合免疫能够明显提高机体的免疫水平。通过在小鼠前列腺癌模型上系统地检测不同疫苗的免疫水平,评价以PSCA作为治疗靶点的疫苗的免疫效果,为前列腺肿瘤疫苗的研制及临床研究奠定基础。为构建重组亚单位疫苗,通过对PSCA进行结构分析,保留其活性结构域的部分,然后将PSCA、HSP70基因分别克隆至原核表达载体pET21a(+)质粒中,构建重组表达质粒pET21-PSCA-HSP。SDS-PAGE电泳分析表明PSCA-HSP在E.coli中得到可溶性表达。为了评价重组亚单位疫苗的免疫效果,在大肠杆菌系统中表达了PSCA、HSP70及PSCA-HSP重组蛋白,并经过色谱层析技术获得了具有一定纯度的重组蛋白。免疫C57BL/6雄性小鼠后,通过上述技术方法检测了针对PSCA的细胞免疫和体液免疫水平,并观察小鼠的肿瘤生长情况及死亡时间。研究结果表明,免疫重组蛋白PSCA-HSP能够激起PSCA特异的细胞免疫反应;PSCA、PSCA+HSP及PSCA-HSP免疫组均能诱导机体产生较高的针对PSCA的抗体,三组之间的抗PSCA抗体水平没有差异;HSP、PSCA+HSP及PSCA-HSP免疫组均诱导机体产生了较高水平的针对HSP的抗体,三组之间的抗体水平没有差异;免疫PSCA、PSCA+HSP及PSCA-HSP均能抑制小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的存活时间,其中PSCA-HSP的抗肿瘤效果要优于其它两组。为构建重组腺病毒载体疫苗,将PSCA基因从实验室保存的质粒pcDNA-PSCA中酶切获得,将PSCA-HSP融合基因从实验室保存的质粒pcDNA-PSCA-HSP中酶切获得,分别克隆至pDC316质粒中,构建重组穿梭质粒pDC316-PSCA及pDC316-PSCA-HSP,将重组穿梭质粒进行腺病毒包装,制备重组腺病毒Ad5-PSCA及Ad5-PSCA-HSP。为了评价重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,免疫C57BL/6雄性小鼠后,通过ELISPOT、胞内细胞因子检测和ELISA等手段检测了针对PSCA的细胞免疫和体液免疫水平,并观察小鼠的肿瘤生长情况及死亡时间。研究结果表明,免疫Ad5-PSCA及Ad5-PSCA-HSP均能够激起机体强烈的PSCA特异的细胞免疫反应,但是各组针对PSCA的抗体效价水平均较低;免疫Ad5-PSCA及Ad5-PSCA-HSP均能抑制小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的存活时间,其中Ad5-PSCA-HSP的抗肿瘤效果要优于Ad5-PSCA。基于“prime-boost”免疫策略,本研究将以PSCA为靶点的重组腺病毒载体疫苗以及重组亚单位疫苗联合免疫C57BL/6雄性小鼠,通过上述各项免疫指标的检测比较不同疫苗的细胞及体液免疫水平,并观察小鼠的肿瘤生长情况及死亡时间。研究结果表明,各免疫组均能激起PSCA特异的细胞及体液免疫反应;各免疫组均能抑制小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的存活时间,其中Ad5-PSCA-HSP+PSCA-HSP混合免疫方式获得了最佳的抗肿瘤效果。本研究构建了基于PSCA为靶点的重组腺病毒载体疫苗及重组亚单位疫苗,并在小鼠前列腺肿瘤模型上评价了不同疫苗的免疫效果,为前列腺肿瘤疫苗的研制及临床研究奠定基础。