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基因的表达调控在很大程度上由各类转录因子介导。转录因子Ets1是ETS蛋白家族的基本成员,可以以反式作用元件形式行使功能或与其它转录因子结合形成调控复合体发挥转录激活或抑制作用。RLIM同时是转录抑制辅助蛋白和环指E3泛素连接酶,在多种动物的神经系统发育中意义重大。因此,研究Ets1对RLIM的调控作用,可能对积累转录因子Ets1调控规律的数据、探知RLIM基因结构、提示生物体生长发育、细胞分化等过程的调控机制具有重要价值,并为癌症的分子机制探究提供有意义的线索。
体外实验中,RLIM编码基因的类似启动子区可被包括ETS相关蛋白的一些转录因子激活。我们首先运用双萤光素酶检测系统通过对RLIM编码基因启动子转录活性区的检测和生物信息学分析,在RLIM基因转录活性区发现2个转录因子Ets1的结合位点,进一步的凝胶滞留实验表明Ets1对RLIM的转录激活依赖于Ets1蛋白与RLIM基因上Ets1结合位点的直接结合。但RT-PCR结果却显示Ets1反而抑制了RLIM mRNA的水平。
免疫荧光染色说明Ets1和RLIM蛋白在细胞中共定位,预示着蛋白间的联系,于是进行了pull-down实验,证明体外情况下,Ets1和RLIM可以直接结合。为了检验Ets1是否在蛋白水平上对RLIM也有影响,进行了Western Blotting实验,结果显示,Ets1对细胞内源和外转的RLIM蛋白都有轻微抑制作用。
结果显示:Ets1蛋白既可以与RLIM基因上Ets1结合位点的直接结合,也可以和RLIM蛋白直接结合,结合到RLIM基因上的Ets1起到转录抑制作用,结合到RLIM蛋白的Ets1轻微下调细胞内源RLIM蛋白水平。表明Ets1在RLIM转录调控和翻译后调控中发挥抑制作用。