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研究背景与目的:急性胰腺炎是一种起病急、进展快的疾病,重症患者病死率高达50%。但其发病机制尚不完全清楚,目前研究认为:急性胰腺炎是由于胰腺组织中促炎细胞因子所产生的一系列连锁反应和放大效应,导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiorganfunctional disturbance symptom complex,MODS)。各种细胞因子、炎症介质等表达异常在急性胰腺炎发病机制中的作用成为目前研究的热点。核转录因子κB(nuclear-factorκB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,广泛表达于各种细胞中,调控诸多细胞因子的表达,对细胞增殖、凋亡和炎症发挥重要的调节作用。已有研究表明:急性胰腺炎时白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等前炎因子引起NF-κB活化,促使NF-κB从胰腺腺泡细胞质转移至细胞核,结合相应靶基因的核位点并启动其转录,加速炎症的进展。吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)作为一种特异性的NF-κB抑制剂,经皮下注射后可抑制NF-κB的活化,从而影响其下游因子的表达。目前,关于急性坏死性胰腺炎发病机制的研究多是建立在大鼠模型基础上的。本研究通过检测急性坏死性胰腺炎(acute necrotizingpancreatitis,ANP)大鼠胰腺组织核转录因子、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、脂质过氧化物酶(lipid peroxidase,LPO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活性及E-selectin(E-选择素)表达变化,探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对ANP的干预作用。研究方法:本研究第一步采用腹腔内分两次注射20%左旋精氨酸(间隔1小时,总质量为5 g/kg大鼠质量)制作大鼠急性坏死性胰腺炎模型(含PDTC干预模型)并验证模型构建成功与否;第二步考察PDTC对ANP大鼠模型E-selectin、氧化应激相关酶的干预效果。36只大鼠被随机分为:正常对照组、ANP组、左旋精氨酸+1 mg/kg PDTC前1 h干预组、左旋精氨酸+1 mg/kg PDTC后3 h干预组、左旋精氨酸+100 mg/kg PDTC前1 h干预组、左旋精氨酸+100 mg/kg PDTC后3 h干预组,每组各6只大鼠。各干预组于第一次左旋精氨酸注射前1 h或后3 h分别皮下注射两种剂量(1 mg/kg或100 mg/kg)的PDTC,正常对照组以生理盐水代替左旋精氨酸注射。左旋精氨酸或生理盐水注射24 h后处死大鼠。第一步通过以下指标验证ANP大鼠模型:1)开腹观察大鼠胰腺及周围组织形态;2)苏木素-伊红(haematoxylin-eosin,HE)染色检测并按改良Schmidt评分标准对大鼠胰腺组织进行评分;3)按酶法检测大鼠血清淀粉酶。第二步检测以下指标:1)免疫组织化学测定胰腺组织E-selectin表达;2)凝胶电泳迁移阻滞试验(electrophoreticmobility shift assay,EMSA)检测胰腺组织核蛋白提取物中NF-κB DNA结合活性;3)比色法检测胰腺组织匀浆中MPO、LPO、NOS的活性;。研究结果:大鼠24小时处死后,ANP组中,开腹可见大鼠胃肠管胀气、部分肠管坏死,大量血性腹水,胰腺充血肿胀明显、部分可见坏死灶、胰周有皂化斑,病理标本改良Schmidt评分、血淀粉酶值与正常对照组比较有统计学意义(P＜0.05),提示用左旋精氨酸诱导急性坏死性胰腺炎大鼠模型成功;构建各PDTC干预模型后发现:1 mg/kg PDTC干预组的大鼠胰腺及周围组织形态好转,胰腺组织病理标本评分及血淀粉酶值均下降,与ANP组比较有统计学意义(P＜0.05),尤以左旋精氨酸+1 mg/kgPDTC前1 h干预组明显好转;100 mg/kg干预两组大鼠胰腺及周围组织形态类似于ANP组,胰腺组织病理标本评分和血淀粉酶值较ANP组下降不明显,无统计学意义(P＞0.05)。ANP组及PDTC各干预组中,1)大鼠胰腺MPO、LPO、NF-κB、iNOS(inductible nitric oxide synthase,诱导型一氧化氮合酶)活性和E-selectin表达高于正常对照组(P＜0.05),1 mg/kg PDTC干预组(特别是左旋精氨酸+PDTC前1 h干预组)上述指标明显下调(P＜0.05);2) cNOS(constitutive nitric oxide synthase,结构型一氧化氮合酶)活性低于正常对照组(P＜0.05),而1 mg/kg PDTC干预组cNOS活性接近正常水平。100 mg/kg PDTC对上述指标无影响。研究结论:1)通过分两次间隔1 h经大鼠腹腔内注射5 g/kg大鼠体质量的左旋精氨酸能诱导急性坏死性胰腺炎大鼠模型;2) 1 mg/kg PDTC干预特别是1 mg/kg PDTC预处理通过抑制NF-κB活化下调E-selectin的表达,降低氧化应激相关酶的活性,减轻ANP炎症程度,对ANP大鼠具有保护作用;而100 mg/kg PDTC则无保护作用。