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[研究背景]人体内的IL-12主要由抗原递呈细胞(如单核细胞和巨噬细胞、树突状细胞)及B细胞产生,是一种重要的致炎细胞因子,分子量为70KD,由40KD(p40)和35KD(p35)两条多肽链组成。最近有研究发现IFN-γ可能诱导细胞趋化因子CXCL10的表达,抑制分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的产生,促进慢性阻塞性肺病(COPD)气道炎症和肺气肿的过程。而IFN-γ可促进IL-12的产生,两者之间可通过正反馈途径,在调节Th亚群分化上产生协同作用。IL-12B位于染色体5q31-q33,编码p40,全长16kb,在遗传学研究中发现该染色体区域与某些呼吸系统疾病存在相关性。ADAM33是近年来新发现的解整合素-金属蛋白酶(ADAM)家族成员之一。ADAM33定位于第20号染色体短臂13号位(20 p13),主要与气道上皮细胞损伤后的修复有关,此基因主要在肺的平滑肌细胞、成肌纤维细胞和成纤维细胞表达。在气道上皮细胞、炎性细胞及免疫细胞中不表达。当ADAM33活性改变时,可能引起气道平滑肌细胞和成纤维细胞的功能改变,因此认为ADAM33基因可能与小气道重塑,气道高反应性及炎症等有关。因此,IL-12B基因及ADAM33基因对COPD的发生发展可能起了重要的作用,但是目前在山东汉族人群内尚未有IL-12B基因及ADAM33基因多态性与COPD的相关性进行的研究。[研究目的]利用病例-对照研究方法探讨IL-12B基因及ADAM33基因多态性与山东汉族人群慢性阻塞性肺病之间的相关性,寻找山东汉族人群COPD发病的易感基因,为COPD高危人群的筛选、早期预防和临床治疗提供理论依据。[研究方法]1.COPD组与对照组样本收集:在山东汉族人群中收集COPD患者及正常对照血样并提取基因组DNA。所收集的COPD患者均符合中华医学会呼吸病学分会2007年制订的慢性阻塞性肺病诊断标准;同期健康体检者作为对照组。所有受试对象均排除支气管扩张、肺结核、肺部肿块、肺间质纤维化、胸部手术等呼吸系统病史及心脏病等其他疾病,经过详细的病史调查和体格检查,并进行胸部X检查和肺功能测定。2.基因分型,基因型及等位基因频率统计:利用适宜的基因分型方法在COPD组与对照组所有个体中对多态位点进行基因型分析,并采用了聚合酶链式反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)方法对IL-12B基因1188A/C位点及ADAM33基因T1位点进行分型。根据琼脂糖凝胶电泳结果确定个体基因型,统计出病例组与对照组中的基因型频率及等位基因频率。3.Hardy-weinberg平衡吻合度检验:根据Hardy-weinberg平衡定律计算多态位点在COPD组和对照组中的预期基因型频率,利用卡方检验比较观察到的基因型频率与预期基因型频率间的差异,以P＜0.05表示差异具有统计学意义。以确定所选取的COPD组与对照组样本是否具有群体代表性。4.基因型与等位基因分布差异检测:利用卡方检验比较各多态位点在COPD组与对照组间的基因型频率及等位基因频率差异,以P＜0.05表示差异具有统计学意义。若多态位点的基因型频率及等位基因频率在组间具有统计学差异,说明该多态位点与COPD具有相关性,反之则无相关性。[结果]1.IL-12B基因1188A/C多态位点AA、AC、CC基因型频率在病例组中分别为0.3333、0.4784和0.1883,在对照组中分别为0.3573、0.4756和0.1671,A和C等位基因型的频率在病例组中分别为0.5725和0.4275,在对照组分别为0.5951和0.4049,该位点基因型和等位基因型分布在病例组与对照组P值分别为0.689,0.389,差异均无统计学意义。2.ADAM33基因T1位点在中国山东汉族人群中具有多态性,在COPD组与对照组中处于遗传平衡状态,其基因型、等位基因频率在COPD组与对照组间差异无统计学意义(P=0.117,P=0.090)。[结论]1.IL-12B基因1188A/C位点多态与山东汉族人群慢性阻塞性肺病无相关性。2.ADAM33基因T1位点与中国山东汉族人群COPD无相关性。