背景 恶性肿瘤特别是实体瘤的快速生长和转移与肿瘤的血管形成密切相关。新生血管抑制剂能有效抑制肿瘤新生血管形成而无耐药性，将使肿瘤处于“休眠”状态，配合放疗、化疗、手术等治疗，将达到理想的治疗效果。Endostatin是一种强烈的新生血管形成抑制因子，在实验性抗肿瘤生长方面获得了显著效果，但它使用量大，需反复注射，而内皮细胞抑制素的大量制备较困难，为其进一步的临床运用带来了一定的困难。 目的 本实验拟构建含人Endostatin基因的腺病毒载体并包装成高滴度重组腺病毒，通过体内、外抗结肠癌作用的实验研究，初步探索利用腺病毒转染人Endostatin基因进行基因治疗的可行性。 方法 首先，将人Endostatin的cDNA克隆至腺病毒穿梭质粒pAdCMV－Linkl，构建成pAdCMV-IL₃-Endo。然后用脂质体法将上述穿梭质粒与质粒pBHG10共转染293细胞，经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒Ad-IL₃-Endo。扩增、纯化重组腺病毒Ad-IL₃-Endo，以293为靶细胞测定病毒滴度。用X—gal法测定转染效率，用Western blot法检测Endostatin蛋白的表达，并观察转染细胞上清对不同血管内皮细胞增殖的影响。将转Ad-IL₃-Endo、AdCMVLacZ或野生型SW620细胞接种裸鼠，观察肿瘤出现的时间、肿瘤生长速度并计算肿瘤体积。建立皮下荷瘤裸鼠模型及肿瘤肺转移模型，分别经瘤体内注射和经尾静脉注射给予Ad-IL₃-Endo进行治疗，观察局部肿瘤生长、荷瘤鼠存活及肺部肿瘤结节数情况。用免疫组化Envision法检测肿瘤组织中MVD及VEGF的表达情况。 结果 1．通过同源重组法获得了所需的含人Endostatin目的基因的复制缺陷型重第二军医大学 博士学位论文组腺病毒，经初步纯化后获得较高的病毒滴度，约1．0X10’PFU加； 2．重组腺病毒体外感染SW620细胞的转染效率约为90％，Western blot法检测到转染细胞上清中有Endostatin蛋白的表达； 3．Ad－IL。－EndO体外转染SW620细胞并不影响细胞的体外增殖能力，但其上清能抑制不同血管内皮细胞的生长： 4．转人Endostatin的SW620细胞的体内致瘤性降低，月瘤生长减缓； 5．分别经瘤体内注射和经尾静脉注射给予Ad－IL。－Endo进行治疗，可使局部肿瘤生长减缓甚至停滞，荷瘤鼠存活期延长，肺部肿瘤结节数减少； 6．免疫组化可见与对照相比，肿瘤组织内MVD显著减少、VEGF的表达也明显减少。 结论 利用腺病毒携带人Endos亡atm基因进行实验性抗结肠癌肿瘤治疗能获得较好的疗效，为今后进一步的实验研究及临床应用打下了良好的基础。