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L-脯氨酸-间-双(2-氯乙)胺基-L-苯丙氨酰基-L-正缬氨酸乙酯盐酸盐(MF13)是一个新颖的含三个肽的氮芥类化合物,分子量为566。MF13在体外对所测定的7株不同来源的人肝癌细胞系均有较强的抗增殖活性,IC50值在0.32~2.32μM之间,IC90值在3.84~29.20μM之间;以人淋巴细胞和正常肝细胞为正常细胞对照的实验结果表明MF13毒性小,对肝癌细胞有较好的选择性。MF13冲击性给药的实验结果显示IC75浓度的MF13与细胞冲击性接触,接触2小时细胞的存活率<50%,8小时细胞的存活率与连续接触72小时的细胞存活率无显著性差异,提示MF13起效快,作用持久。 流式细胞仪检测结果显示将Bel-7402或HepG2细胞经MF13处理后主要被阻断在S期,24小时后S期细胞所占的比例超过75%;细胞形态学分析和DNA琼脂糖凝胶电泳结果表明MF13作用后的肝癌细胞出现典型的细胞凋亡特征:在形态学上表现为细胞质浓缩,染色质凝集,细胞核固缩,有的细胞核裂解为核碎片等;在生化学上,Bel-7402细胞被0.88μM或更高浓度的MF13作用72小时,在琼脂糖凝胶电泳图上清楚呈现180-200bp整数倍的梯状条带,梯状条带的出现与MF13呈剂量依赖性。 Western Blot的结果表明,MF13作用于Bel-7402或HepG2细胞6小时后细胞内磷酸化的pRb蛋白表达量增加(pRb蛋白磷酸化是Rb蛋白的失活形式,出现在S期),提示细胞被阻断在S期,这与细胞周期分析结果一致;MF13虽然不改变凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白表达量,但能明显上调凋亡促进因子Bax的蛋白表达量,且Bax蛋白表达量的增加与MF13的作用呈时间依赖性和剂量依赖性,Bcl-2/Bax的比率下降,细胞趋向凋亡,MF13同样能使CEM(人急性淋巴白血病细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)细胞内Bax蛋白的表达量增