论文部分内容阅读
重金属锌(Zn)是动物体内不可或缺的元素,因此各类动物性食品中都含有锌。锌是人体含量最多的微量元素,其含量高达3g之多,主要以锌离子的形式参与体内的代谢,参与人体内200多种酶的合成与活化,是机体新陈代谢中必不可少的物质。锌离子通过参与体内蛋白质的合成来促进体内细胞的分裂、生长和再生,从而影响儿童和青少年的生长发育。 人体缺锌时会引起一系列的生理现象紊乱,包括组织器官的生理功能异常。如生长发育不良、食欲不振、智力发育差等,同时味觉和视觉也会受影响。 锌与其它元素在人体内的比例与人的健康关系很大。当锌铜比值过大时易发生高血压、冠心病。锌钼比值过大则预示着癌症晚期。 人体摄入锌的量过多时,会造成人体锌中毒,出现呕吐、腹泻,损害肝、肾、血管和心脏功能,甚至造成死亡。因此研发一种快速、高效的方法去检测食品和环境中重金属锌离子的含量来保证食品安全显得尤为重要。 本文主要采用分子偶联技术、细胞融合技术、免疫酶技术,建立重金属锌离子的一种新的免疫检测方法。 通过采用异硫氰酯法用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)将 Zn2+和 BSA偶联形成完全抗原 Zn2+-ITCBE-BSA。同理,使用相同的方法螯合 Zn2+和 OVA形成包被原Zn2+-ITCBE-OVA。通过核酸蛋白分析仪、SDS-PAGE电泳、电感耦合等离子体原子发射光谱法和免疫小鼠后多抗血清的ELISA鉴定:免疫原与包被原的蛋白浓度分别为8.48 mg/mL和9.23 mg/mL;Zn2+含量分别为101.1μg/mL和90.09μg/mL;间接ELISA效价达到1:1.28×104,阻断ELISA检测Zn2+-EDTA的半数抑制浓度(IC50)为26.85 ng/mL,与EDTA及其它金属离子螯合物无交叉反应。 采用背部多点注射免疫法将Zn2+-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠5只,5次免疫后,用间接ELISA方法和阻断ELISA方法进行检测筛选出备用融合小鼠。通过细胞融合技术,间接ELISA方法和阻断ELISA方法筛选出2B3D8、2A11E1和4B6C4共3株敏感特异的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法制备Zn2+-EDTA mAb,间接ELISA检测其细胞培养上清效价分别为1:2.56×103、1:1.28×103、1:2.56×103,腹水效价分别为1:2.26×105、1:1.18×104、1:1.18×105,同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG1/λ,其中特异性最好的2B3D8株,其IC50为26.85μg/L,与其它金属离子螯合物无交叉反应。本试验制备的Zn2+-EDTA pAb和Zn2+-EDTA mAb均可用于Zn2+污染的免疫学检测,其中Zn2+-EDTA mAb效果更好。 应用Zn2+-EDTA mAb研制出Zn2+污染快速检测试剂盒(Zn2+-Kit),用阻断ELISA测其灵敏度,添加回收试验测其准确度,批内批间试验测其精确度,交叉反应试验测其特异性。试剂盒灵敏度为7.46 ng/mL,添加回收试验和批内批间试验的变异系数均小于15%,达到标准要求,与其他重金属螯合物无交叉反应,4℃保存保质期可达6个月。