白细胞介素7(IL-7)对不明原因复发性流产小鼠模型外周Th17/Treg细胞以及妊娠结局的影响

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目的:探讨着床期应用白细胞介素7(IL-7)对不明原因复发性流产小鼠模型外周Th17/Treg细胞以及妊娠结局的影响。方法:1)将CBA/J雌鼠分别与DBA/2、Balb/c雄鼠2:1合笼,构建正常小鼠妊娠模型和自然流产小鼠模型;2)小鼠合笼见阴道栓为妊娠第0天,将自然流产模型小鼠随机分为两组:流产小鼠对照组及流产小鼠研究组;3)研究组在小鼠孕第4天腹腔注射IL-715ul/只/天,隔天一次,连续3次,对照组不用药,分别于孕第14天处死各组孕鼠;4)计算各组胚胎吸收率,探讨IL-7对小鼠流产模型妊娠结局的影响;5)提取各组小鼠脾脏淋巴细胞;6)流式细胞仪检测分析孕鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+、CD4+IL-17A+细胞比例变化,来探讨IL-7在小鼠流产模型对Treg/Th17细胞的作用;7)荧光定量PCR检测孕鼠子宫蜕膜Foxp3mRNA和RORγt mRNA的变化,探讨IL-7是否可以调节Treg细胞特异性转录因子Foxp3和Th17细胞特异性转录因子RORγ在小鼠流产模型外周的表达。结果:1)成功建立正常小鼠模型和流产小鼠模型;2)经IL-7处理的流产模型孕鼠胚胎吸收率(33.78%)明显高于正常小鼠对照组(8.6%)、自然流产模型孕鼠(25.58%),差异显著(P<0.05);3)流式分析结果显示:经IL-7处理的流产小鼠研究组脾淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例(2.71±0.28%)显著低于正常小鼠对照组(4.57±0.31%)、自然流产小鼠对照组(3.51±0.29%),差异显著(P<0.05); IL-7处理的流产小鼠脾淋巴细胞CD4+IL-17A/CD4+细胞比例(6.45±0.28%)高于正常小鼠(1.84±0.16%)、低于流产小鼠(4.29±0.63%),差异显著(P<0.05);4)荧光定量PCR扩增Foxp3mRNA和RORγt mRNA的变化,经IL-7处理的流产小鼠Foxp3mRNA的2-CT值为0.43±0.18,Foxp3mRNA的表达低于流产小鼠0.67±0.16(P<0.05);RORγt mRNA的2-CT值为4.77±1.38,高于流产小鼠1.97±0.53(P<0.05)。结论:小鼠的自然流产模型建立成功。在相同实验条件下,经过IL-7处理的流产小鼠研究组与流产小鼠对照组比较,胚胎吸收率上升,CD4+IL-17A+Th17细胞比例增高,Th17的特异性转录因子RORγt表达水平亦升高,三者在变化趋势上的一致性共同提示IL-7影响Th17细胞的存活和增殖,抑制Th17细胞的凋亡,导致Th17细胞增多,与此同时IL-7也影响到Treg细胞的数量和功能。推测IL-7使不明原因复发性流产的Th17/Treg失衡更向Th17细胞极化,不利于妊娠的维持,将会加重流产的发生。
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