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1993年Pasternack等人首次提出共振光散射(resonance light scattering,RLS)技术,用于生物大分子组装化学以来。共振光散射技术因其实验仪器简单,方法灵敏度高而倍受广大化学研究者关注。在近10年来发展迅速,已成为超分子化学、物理化学和分析化学领域中强有力的分析技术。 但随着RLS技术的进一步发展,其弊端也日益明显。表现在:(1)选择性差,RLS技术基于本体溶液测定,无法消除溶液中共存物质的光散射信号的干扰,限制了RLS技术选择性的进一步提高;(2)在一些体系中,RLS信号不稳定,重现性差,限制了不稳定分析试剂在RLS技术的应用;(3)RLS技术作为常规分析技术还没有应用于在线检测。(4)基于单波长测定的RLS技术,受仪器条件,电源电压的外界因素影响较大。 为了弥补RLS技术的不足,我们将RLS技术与液/液界面(liquid/liquid interface)上的全内反射(total internal reflection)现象相结合,建立了全内反射共振光散射(total internal reflected resonance light scattering,TIR-RLS)技术,通过分析试剂与被分析物形成具有两亲性的复合物(amphiphilic species)并集在水/油界面(water/oil interface),将被分析物与水溶液中的共存物干扰成分。使得TIR-RLS技术具有更好的选择性和更高的灵敏度。同时,我们将流动注射分析技术(flow injection analysis,FIA)方法的高度重复性,高效率,易于实现自动化的特点结合RLS技术的灵敏度高,仪器简单的特点,成功开发了流动注射—共振光散射(flow injection analysis-resonance light scattering,FIA-RLS)联用技术,使RLS技术克服了信号不稳定的缺点。此外,为克服单波长测定受仪器、电源等外界因素的影响,而发展了RLS比率分析法,并将此方法成功应用于卟啉在肝素上聚集研究,该方法较RLS技术能够更灵敏地表征化学反应的动力学过程。主要研究西南师范大学硕士论文论文摘要内容如下: 1.以核酸、肝素、小聚碱为研究对象,在液/液界面上运用nR.RLS技术建立灵敏的分析方法,主要结果如下: (l)在pH 3.3,离子强度0.003 molL‘时,澳化十六烷基三甲基按(crMAB)与核酸通过静电引力共吸附到液/液界面上形成双性复合物,导致强烈的TIR·RLS信号,最大峰位于370.0 nm,TIR一RLS信号强度与核酸的浓度呈线性关系,方法检出限小于6.0 ng mL‘。该方法对普通金属离子抗干扰能力比RLs技术的抗干扰能力要高出100倍,方法用于合成品分析,回收率在94.4%一104.8%之间,结果令人满意。 (z)当pH 7.00,离子强度0.oosmulL‘的条件下,核酸与u(llD和苯扎澳馁(Benzalkanium Bromide,BzB)相互作用形成三元双亲性的复合物u(Ilx}核酸一苯扎澳按,该复合物吸附和富集在水/四氯化碳(HZo/Ccl4)界面上,引起迅速增强的TIR一R此信号,其标a、位于365.0 nm,所得信号强度与核酸浓度成比例关系,由此建立测定核酸的灵敏方法,ctDNA,fsDNA和yRNA的检测限分别为7·sng mL,,6.sng mL-‘和4.sng mL-‘,方法具有良好的选择性。 (3)在pH 8.00条件下,荧光素(fluoreseein,Flu)与小聚碱(b etherine,BE)形成双亲性的复合物,在水/1,2,二氯乙烷(场侧DCE)界面富集,并引起强烈增加的TIR一RLS信号,漏ax位于373.0nm,所得信号强度在一定范围内与BE浓度成正比关系,检测限为1.3 ng mL‘。由此建立测定BE的灵敏方法。方法与药典使用的HPLC方法对照,本方法在分析灵敏度有大大提高。 (4)当pH为6.09,离子强度为o.oo6molL-‘的条件下,肝素(heparin)通过与具有双亲性的罗丹明B(thodamineB,RhB)和澳化十六烷基三甲馁(eetyltrimethylammonium bromide crMAB)相互作用形成三元双亲性的复合物RhB一肝素.CTM户卫,而被RhB和CTM泊丑协同吸附在水/四氯化碳(HZO/CC功界面上,引起迅速增强的TIR一R璐信号,其标ax位于365.0 nm,所得信号强度与肝素浓度成比例关系,由此建立测定肝素的灵敏方法,检测限是3.1 ng mL‘该方法具有良好的选择性。 2.建立了FIA.RLS联用技术并用于肝素含最测定,主要结果如下: (l)在pH2.2条件下,meso一四一(对三甲氨基苯基)叶琳似2卫JP)为探针“‘了西南师范大学硕士论文论文摘要测定了肝素,标ax位于457.0nm。在本实验中用LED代替Xe灯作为激发光源,标ax为459.Onln。固定激发和发射波长在459.0 nm,进行时间扫描,RLS强度与肝素浓度成正比,测定线性范围。一12.00林9 mL‘,检出限4.8 ng mL‘,分析结果证明FL气.RLS技术分析灵敏,操作简单且自动化,试剂消耗量小。方法用于测定肝素注射液实际样品所得结果与厂家标示一致。 (2) pH7.%,离子强度为0.009 molL,,吩噬嗦类碱性染料天青B与痕量的肝素共存时,由于肝素磺酸基和梭酸基的存在而结合成复合物,导致R璐强度显著增强,几max位于340.Onm。坛和人m在340.0 nm,进行时间扫描所得谱线R璐强度与肝素浓度成正比,从而建立测定肝素的F认一R比方法,线性范围是0.01一6.0雌ml一‘,检出限为9.5 ng ml-l。方法用于测定肝素注射液实际样?