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目的：骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有自我更新和多向分化的潜能,在不同的诱导条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞和神经细胞等多种类型的细胞。在治疗神经组织损伤中具有很大的潜力。目前有很多研究显示BMSCs移植有助于神经组织损伤的恢复,但是其恢复功能的确切机制仍然不完全清楚。虽然BMSCs的分化和细胞融合都可能促进神经功能的恢复,但其较低的存活率不可能完全解释神经损害的恢复水平。当前不断有证据显示BMSCs能够通过释放营养因子和细胞因子促进神经组织功能的恢复,而BMSCs本身不发生分化,此种功能称为MSCs的营养效应(trophic effects)。本实验排除BMSCs本身对星形胶质细胞(astrocyte,AS)的作用,使用BMSCs的条件培养液来研究BMSCs的营养效应对CO致AS损伤的影响,探讨BMSCs的营养效应及其临床开发应用。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁特性培养大鼠BMSCs。流式细胞仪检测BMSCs表面抗原的表达情况。当第3代的BMSCs铺满培养瓶底面积的80%左右时,更换含10%胎牛血清的DMEM培养液,培养24小时后收集上清,保存备用。无菌条件下进行大鼠脑皮质AS的培养,纯化,免疫细胞化学染色进鉴定。实验分组：①正常对照组：正常培养液,5%CO2培养箱中培养的AS;②CO组：正常培养液,1%CO+5%CO2培养24h的AS；③条件培养液保护组：分别加入30%、80%2个浓度的条件培养液置于1%CO+5%CO2培养24h,后置于5%CO2培养箱中培养24h和48h的AS；④条件培养液治疗组：正常培养液,1%CO+5%CO2培养24h后分别加入30%、80%2个浓度的条件培养液后置于5%CO2培养箱中培养24h和48h的AS。于倒置相差显微镜下观察一般形态学变化。采用计数板计数法检测各实验组细胞生长增殖情况。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测AS存活率。以比色法测定各实验组细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性；流式细胞仪测定各实验组细胞凋亡率。结果：1、AS的生长增殖隋况：AS在有CO存在的条件下培养24h后数量明显少于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后数量仍明显少于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组数量多于CO组(p<0.05),少于保护组,其中低浓度治疗组<高浓度治疗组。2、AS存活率的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后存活率明显小于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后存活率仍明显小于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24h后低浓度治疗组存活率略大于CO组(p>0.05),高浓度治疗组AS存活率明显大于CO组(p<0.05),小于保护组,其中低浓度治疗组<高浓度治疗组；AS在停用CO的条件下培养48h后治疗组存活率仍小于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度治疗组<高浓度治疗组。3、AS活性的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后LDH释放量明显多于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后LDH释放量仍明显多于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组的LDH释放量少于CO组,多于保护组,其中培养24h后低浓度治疗组略大于高浓度治疗组(p>0.05)；培养48h后低浓度治疗组明显大于高浓度治疗组(p<0.05)。4、AS凋亡的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后细胞凋亡率明显大于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后细胞凋亡率仍明显大于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组凋亡率小于CO组(p<0.05),大于保护组,其中低浓度治疗组>高浓度治疗组。结论：CO可降低体外培养AS的生长速度；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应能够增加AS的生长速度。CO可降低体外培养AS的存活率；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应能够增加AS的存活率。CO可使体外培养AS的LDH释放量增加,破坏细胞膜的完整性；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应可降低LDH释放量,保护细胞膜的完整性。CO可促进体外培养AS的凋亡;在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应对损伤所致的细胞凋亡具有保护作用。