论文部分内容阅读
研究目的:七氟醚(Sevoflurane, Sevo)是一种吸入性全身麻醉药,婴幼儿期七氟醚暴露对发育期学习记忆的影响是麻醉临床关注的热点。电压门控性钙离子通道(Voltage-gated Ca2+channels, VGCCs)参与调节神经元兴奋性,对大脑发育起至关重要作用。本论文应用膜片钳技术检测正常大鼠大脑快速发育期(1-5周)内海马CA1区VGCCs特性的变化,研究大鼠海马VGCCs的发育关键期;研究1周龄大鼠七氟醚暴露对发育期海马CA1区锥体神经元VGCCs活性的影响,探索七氟醚对大鼠快速发育期(1-5周)海马VGCCs活性的抑制作用,探讨不同浓度七氟醚对VGCCs的不同程度的抑制作用,为七氟醚的临床应用提供实验研究支持。研究方法:1.实验动物分组1周龄SD大鼠45只随机分为正常组(Control, Con)、2.1%七氟醚组(2.1%Sevoflurane, Sevo1)和3%七氟醚组(3%Sevoflurane, Sevo2)。每组均按照出生后的周龄分为5组:1周龄(1w)组、2周龄(2w)组、3周龄(3w)组、4周龄(4w)组、5周龄(5w)组。2.七氟醚暴露模型鼠的制备将1周龄Sprague-Dawley (SD)大鼠放置于自制的麻醉诱导箱内进行气体暴露,正常组大鼠自主吸入100%氧气,2.1%七氟醚组和3%七氟醚组分别吸入浓度为2.1%和3%的七氟醚,每组均持续暴露6小时。3.大鼠海马CA1区锥体神经元的急性分离将大鼠快速断头取脑,分离出海马,手工切成400-600um的脑片置于32℃人工脑脊液中孵育1小时,然后分离出海马脑片CA1区,将其酶解20-40分钟,吹打组织片制成细胞悬液,取其上清液贴壁30分钟。4.数据记录及统计分析采用膜片钳全细胞记录技术,分别记录以上5个周龄组大鼠海马CA1区锥体神经元的VGCCs电流,利用软件Clampfit10.3、Origin6.0和SPSS18进行数据处理(电流密度、稳态激活特性、稳态失活特性)和统计学分析。研究结果:1.正常组大鼠快速发育期海马CA1区锥体神经元VGCCs特性1-5w正常组大鼠海马CA1区锥体神经元VGCCs最大电流密度(pA/pF)分别为:Con1w,9.56±0.63;Con2w,10.84±0.24;Con3w,14.08±0.93;Con4w,15.00±0.84:Con5w,17.22±0.59.随着鼠龄的增加,VGCCs的最大电流密度逐步增大。其中,Con2w与Con3w组之间VGCCs最大电流密度的增幅最大,为(29.89±0.58)%(P<0.01)。随着鼠龄的增加,VGCCs急态激活曲线向超极化方向移动,Con1w与Con2w组之间VGCCs的半数激活电压(mV)逐渐减小,分别为-7.89±0.48和-10.84±0.44(P<0.05),Con2w与Con3w组、Con3w与Con4w组、Con4w与Con5w组之间半数激活电压无显著性变化(P>0.05);1-5w大鼠海马VGCCs的稳态激活斜率因子(k)无显著性变化(P>0.05)。随着鼠龄的增加,VGCCs急态失活曲线向超极化方向移动,大鼠海马VGCCs的半数失活电压(mV)和斜率因子(k)均无显著性变化(P>0.05)。2.七氟醚组大鼠快速发育期海马CA1区锥体神经元VGCCs特性与Con组相比,Sev011w.Sevo21w组与Sev012w.Sevo22w组电流密度均有所降低(P<0.01),且Sevo12w与Sevo22w组最大电流密度均低于Con1w组。1w时,Sevo1和Sevo2组最大电流密度的降低幅度分别为28%(P<0.01),62%(P<0.01);2w时,Sevo1和Sevo2组最大电流密度的降低幅度分别为22%(P<0.01),43%(P<0.01)。在3w、4w与5w时没有显著性差异(P>0.05)。Sevo21w与Sevo22w组VGCCs稳态激活曲线向去极化方向移动,半数激活电压和斜率因子增大(P<0.01):Sevo23w、Sevo24w与Sevo25w组没有显著性差异(P>0.05).Sevo1组VGCCs稳态激活曲线没有显著性变化(P>0.05)。Sevo21w、Sevo22w与Sevo23w组VGCCs稳态失活曲线向去极化方向移动,半数失活电压和斜率因子增大(P<0.01);Sevo24w与Sevo25w组半数失活电压和斜率因子没有显著性变化(P>0.05)。Sevo11w与Sevo12w组VGCCs稳态失活曲线向去极化方向移动,半数失活电压增大(P<0.01),斜率因子没有显著性差异(P>0.05):Sevo13w、Sevo14w与Sevo15w组半数失活电压和斜率因子均没有显著性变化(P>0.05)。结论:1.正常1-5w大鼠海马CA1区神经元VGCCs电流密度随着鼠龄的增加而逐步增大,尤其是在2w到3w之间增长最快,大鼠出生后2w到3w是VGCCs的发育关键期。2.2.1%和3%七氟醚均明显降低1-2w大鼠海马VGCCs电流密度。3%七氟醚抑制1-2w大鼠海马VGCCs的稳态激活和1-3w大鼠海马VGCCs的稳态失活,而2.1%七氟醚对1-2w大鼠海马VGCCs的稳态失活具有抑制作用,对稳态激活特性没有显著性影响。七氟醚持续抑制大鼠快速发育期海马神经元VGCCs的活性,其抑制作用随周龄的增加而降低,在4-5w时恢复到正常发育水平。3.2.1%七氟醚对VGCCs电流密度、稳态失活的抑制作用在0.01的统计学水平上比3%七氟醚小,不同浓度的七氟醚对VGCCs活性的抑制程度不同。