前言 本研究通过应用最先进的抑制差减杂交技术，完成了对HBX转染的HepG2X细胞和对照细胞HepG2CAT的cDNA文库的差减杂交，观察了两株细胞因HBx转染而导致的基因表达差异。对有差异的其中2个基因片断，进一步克隆出了全长基因序列并做了初步功能分析。 材料与方法 ①建立逆转录病毒质粒表达载体PSLXCMVHBV-X及PSCXCMVCAT，用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞PA317，收集富含重组逆转录病毒上清，进一步感染HepG2细胞，经G418筛选后，挑选阳性克隆，分别做WesternBlot分析检测HBxAg的表达及氯霉素乙酰转移酶（CAT）活性分析；②用Clontech公司试剂盒做HepG2X和HepG2CAT cDNA文库的差示筛选。首先用Qiagen公司试剂盒提取细胞总RNA和mRNA，反转录合成cDNA，经限制性内切酶消化，引物连接及两轮杂交后，完成抑制PCR及巢式PCR扩增。将PCR产物用Qiagen胶提试剂盒纯化，连接到PT7Blue T vector（Novagen），做序列分析，并用GCG软件在基因库中比较；③用P³²随机引物标记法标记探针（Promega）做Northern Blot杂交及地高辛缺口翻译标记法（BOEHRINGER MANNHEIM）做原位分子杂交以筛选基因探针；④用Clontech马拉松全长cDNA扩增试剂盒的5’和3’迅速末端扩增法（RACE PCR）进行全长基因序列扩增。首先设计引物，用Touchdown PCR分别得到期3’末端和5’末端产物，然后进行联