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第一部分 淋巴管内皮细胞的体外培养及其形态学观察 目的:在体外培养淋巴管内皮细胞,观察其生长过程和方式、形态结构及某些生物学特性.同时寻找一种既适于淋巴管内皮细胞生长又适于某些肿瘤细胞生长的共同培养基,以方便进行肿瘤细胞和淋巴管内皮相互作用的研究.1.用保留大组织块的方法,能防止胸导管侧漏和减少污染,加快淋巴管内皮细胞的取材速度和成功率.2.淋巴管内皮细胞在体外培养中仍具有维持体内的一些形态学及生物学特性的能力.3.淋巴管内皮细胞在DMEM中培养成活,使体外研究淋巴管内皮细胞与肿瘤细胞之间的作用成为可能.第二部分 M-21黑色素瘤与淋巴管内皮细胞相互作用的形态学观察 观察M-21黑色素瘤细胞和淋巴管内皮细胞联合培养时两者之间的作用,探讨肿瘤淋巴转移的过程和机理.1.体外联合培养的方法可以显示、观察肿瘤细胞与淋巴管内皮的作用过程.2.肿瘤细胞穿越淋巴管内皮的过程包括粘附、浸润和迁移.3.肿瘤细胞多粘附在LECs连接处,也可以粘附于单个内皮细胞上面.4.肿瘤细胞可通过内皮细胞之间的间隙发生转移(LECs保持完整),也可直接破坏LECs,形成"窗口"样通道发生转移(LECs被破坏).第三部分 肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞粘附的定量研究 目的:不同肿瘤细胞的转移能力和转移方式主要与肿瘤细胞和内皮细胞的粘附及浸润有关.用体外粘附分析方法检测肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的粘附能力,探讨不同肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞粘附的特点.1.肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞具有很强的结合力,二者之间的粘附率与联合培养时间成正比;2.肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞最大粘附速率发生在联合培养后15～30分钟之内;3.不同类型的肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞之间的粘附率不同;4.肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞的生物特异性(如肿瘤来源、类型、形态及表面分子)决定了两者的粘附能力和特异性或选择性.