论文部分内容阅读
目的:观察天冰调督胶囊对激怒应激大鼠情感行为及神经肽、腺苷A1R的影响,探讨中医“怒伤肝”肝胃不和的神经生化基础,以及中药干预治疗的可能机制。
方法:
SD大鼠95只,雄性,清洁级,鼠食,大鼠自由饮食、饮水。大鼠随机分为正常组、激怒应激对照组、中药(天冰调督胶囊)低量组、中药高量组、柴胡疏肝散对照组、西药吗丁啉治疗组6组,激怒应激对照组大鼠20只,其余每组大鼠15只。参考文献方法用长海绵钳钳夹鼠尾的远端1/3处,每次刺激30秒钟。每刺激一次间隔3小时,每鼠每日3次,刺激后各鼠合笼半小时,后分笼饲养。连续刺激造模7天,经检验造模成功后停止继续刺激。
同时观察或刺激7天后,正常组、模型组以蒸馏水2ml灌胃每日一次;中药低、高剂量组分别给以天冰调督胶囊浓缩浸膏制成的混悬液2ml灌胃(0.4g/d/kg及0.8g/d/kg);柴胡疏肝散组以(0.8g/d/kg)浓煎液;西药治疗组吗丁啉0.6mg/d/kg混悬液2ml灌胃,每日一次,连用7天。观察大鼠食量、体重;进行情感行为学指标测试,旷场实验观察通过旷场活动性、拒俘反应性指标观察;抬高迷宫试验观察5min内大鼠在开放臂中向环绕臂移动逃避的时间、进入的次数为指标,观察大鼠情感行为变化。以免疫组织化学方法、免疫印迹法检测治疗后脑组织海马、尾壳核、大脑皮质等区域NPY、腺苷A1R蛋白表达。
结果:
1:各组大鼠体重变化:与模型组比较,中药高剂量组、柴胡组、西药治疗组治疗后体重均明显增高,差异显著。
2:大鼠进食量变化:正常组进食量稳定无明显变化,天冰调督中药、柴胡疏肝散、吗丁啉,可一定程度的改善该模型大鼠进食量。
3:模型大鼠情感行为学指标观察:经观察与治疗后,旷场活动性评分、抬高迷宫实验,中药高量组、中药低量组、柴胡组与单纯模型组比较,均有不同程度的改善,有显著差异(P<0.01~P<0.05);拒俘反应性评分中药高量组、柴胡组与单纯模型组比较,也有不同程度的改善,有显著差异(P均<0.05)。
4:各组大鼠NPY/腺苷A1R表达:模型组在海马CA3、CA1、DG区NPY阳性神经元表达较正常组减少,有显著差异(P均<0.01)。中药低、高量组、柴胡组比模型组相应区域免疫阳性细胞数目明显增加,有显著差异(P均<0.01)。免疫印记法脑组织NPY表达:模型组比正常组明显降低,中药高量组、柴胡组蛋白表达量较模型组明显增加。各组大鼠免疫组化染色腺苷A1R表达:模型组免疫阳性神经元数在尾壳核和海马CA3区内显著减少,与正常组相比有显著差异(P<0.01);在尾壳核和海马CA3区中药高量组、中药低量组较模型组明显增多,差异显著(P<0.01)。免疫印记法脑组织腺苷A1R表达:各组脑尾壳核区腺苷A1R蛋白含量Max OD值比较,模型组比正常组明显降低,有显著差异(P<0.01);而中药高量组蛋白表达量较模型组明显增加(P<0.05)。各组海马CA3区腺苷A1R蛋白含量比较,模型组比正常组明显降低,蛋白表达量减少,有显著差异(P<0.01);中药高量组、低量组蛋白表达量较模型组明显增加,有显著差异(P<0.05)。
结论:
1:夹尾刺激法导致的激怒应激大鼠存在体重、食量、情绪改变,初步认为与中医临床肝胃不和证有一定相似之处。
2:激怒应激大鼠模型存在脑不同部位组织神经肽Y、腺苷A1R的表达异常。
3:天冰调督方药具有改善该模型大鼠体重、进食量,改善模型大鼠情绪异常作用,可作为临床用药的依据之一。
4:天冰调督方药可改善该模型大鼠脑神经肽Y、腺苷A1R的表达异常,初步认为该方药调节应激刺激导致的精神情绪异常可能与改善脑相应区域神经肽Y-、腺苷A1R表达有关。