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第一部分SHCBP1在前列腺癌中的表达和临床意义目的:研究SHCBP1在前列腺癌中的表达情况及其与临床病理参数和预后之间的关系。方法:通过生物信息学方法比较SHCBP1在前列腺癌组织及正常前列腺组织中表达情况;收集福建医科大学附属第一医院前列腺癌标本并构建组织芯片,采用IHC检测SHCBP1在前列腺癌组织及BPH组织中的表达差异,并利用TCGA数据库及本中心前列腺癌临床病理数据分析SHCBP1表达与前列腺癌临床病理参数和生存预后的关系。结果:TCGA数据库及IHC分析结果表明,前列腺癌组织中SHCBP1表达显著高于BPH或正常前列腺组织(P<0.05)。在TCGA数据库中,SHCBP1表达与临床T分期和淋巴结转移密切相关,且高表达SHCBP1患者OS及PCFS均显著降低(P<0.05)。本中心数据显示:SHCBP1表达越高的前列腺癌患者术前PSA水平、Gleason评分及p T分期越高,越容易出现前列腺包膜外侵犯及精囊浸润。多因素Cox回归分析显示,高Gleason评分、高p T分期和SHCBP1高表达是根治性前列腺切除术后BCR的独立预测因素。高Gleason评分、高p T分期、SHCBP1高表达的前列腺癌患者BFS分别显著低于低Gleason评分、低p T分期、SHCBP1低表达的患者(P<0.05)。结论:SHCBP1在前列腺癌中高表达,其表达与T分期、包膜外侵犯、精囊浸润、淋巴结转移、Gleason评分和p T分期密切相关。高表达SHCBP1前列腺癌患者OS、PCFS及BFS显著降低,并且是RP术后BFS独立预测因素。第二部分SHCBP1对前列腺癌细胞增殖与转移的影响目的:研究SHCBP1基因敲减对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移侵袭和远处转移的影响。方法:采用慢病毒载体敲减PC-3及DU145细胞系中的SHCBP1,Western blot和q RT-PCR检测SHCBP1敲减效率。MTT法、流式细胞术及Transwell实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及迁移侵袭能力变化。裸鼠皮下成瘤模型和尾静脉注射转移模型体内验证敲减SHCBP1对PC-3细胞皮下成瘤和远处转移的影响。结果:Western blot和q RT-PCR结果显示SHCBP1敲减后蛋白表达和m RNA表达显著降低。SHCBP1敲减后,PC-3及DU145增殖能力均显著降低(P<0.05)、G2/M期比例显著增加(P<0.05),同时迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。体内实验表明,与对照组相比,SHCBP1敲减可显著减缓PC-3细胞的肿瘤形成和抑制PC-3细胞的远处肺转移。结论:体外和体内实验结果共同表明SHCBP1可促进前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移。第三部分SHCBP1促进前列腺癌增殖和转移分子机制探讨目的:进一步明确SHCBP1发挥癌基因功能、调控前列腺癌增殖及转移的分子机制。方法:利用基因芯片技术分析PC-3细胞SHCBP1敲减后下游基因表达谱变化情况;对差异基因进行生物信息学分析,预测SHCBP1调控的信号通路;q RT-PCR、Western blot和功能回复实验对预测的信号通路进行验证;利用放线菌酮(CHX)和MG-132实验探讨SHCBP1调控TP53的作用机制。结果:1、通过芯片分析共筛选出1820个差异表达基因,包括633个表达上调的差异基因和1187个表达下调的差异基因;生物信息学分析提示SHCBP1敲减后,Hippo信号通路和LATS1-MDM2-TP53信号通路显著激活;2、q RT-PCR和Western blot结果显示SHCBP1敲减后Hippo通路关键基因YAP1和TAZ的m RNA表达、蛋白表达和蛋白磷酸化水平均无明显变化;3、Western blot结果显示SHCBP1敲减后MDM2的蛋白表达水平明显降低,TP53和LATS1的蛋白表达水平显著升高。功能回复实验发现分别敲减LATS1和TP53可逆转SHCBP1敲减对前列腺癌细胞增殖和迁移的抑制。CHX和MG-132实验结果表明SHCBP1敲减可抑制蛋白酶体对TP53的降解,延长TP53蛋白半衰期,增强TP53蛋白稳定性。结论:SHCBP1通过调控LATS1-MDM2-TP53信号通路降低TP53蛋白稳定性进而影响前列腺癌的增殖与转移。第四部分前列腺癌相关ce RNA调控网络及m RNA预后模型的构建与分析目的:通过构建ce RNA调控网络探讨前列腺癌中差异表达RNA的调控机制及预后价值,并构建可预测前列腺癌患者生存结局的m RNA预后模型。方法:通过TCGA数据库提取前列腺癌组织样本基因表达谱数据,对499例前列腺癌组织和52例正常前列腺组织的RNA表达水平进行分析。使用edge R包检测RNA的差异表达,生存分析采用Kaplan-Meier法。基于两组样本中差异表达RNA,构建lnc RNA-mi RNA-m RNA ce RNA调控网络。结果:共筛选773个lnc RNA,1417个m RNA和58个mi RNA在前列腺癌中存在差异表达(P<0.05)。新构建的ce RNA调控网络包含63个前列腺癌特异性lnc RNA,13个mi RNA和18个m RNA。63个差异lnc RNA中有3个,18个差异m RNA中有1个与前列腺癌总体生存期显著相关(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析筛选出4个m RNA(HOXB5,GPC2,PGA5,AMBN),用于构建前列腺癌患者总体生存期的预测模型。ROC曲线分析显示该模型表现良好。结论:本研究成功构建前列腺癌相关lnc RNA-mi RNA-m RNA ce RNA调控网络,为前列腺癌的诊断、治疗和预后评估提供潜在靶点。构建包含4个m RNA的新型评估模型可为前列腺癌患者的生存预测提供更准确的预后信息。