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目的：
通过回顾性分析卵巢高反应对体外受精-胚胎移植/卵胞浆单精子注射(In vitro fertilization-embryo transfer/Intracytoplasmicsperm injection,IVF/ICSI)周期妊娠结局的影响,以及研究高反应状态下子宫内膜接受性标记物的变化,并应用基因芯片技术比较卵巢高反应者与自然周期围着床期子宫内膜基因表达谱的差异,分析相关基因的功能意义,探讨高甾体激素影响子宫内膜接受性的分子机制.
方法
1.回顾性分析本生殖中心近3年来IVF/ICSI周期资料,根据雌二醇(E2)峰值百分位数确定卵巢反应程度,将第25-75百分位数(P25-75)作为卵巢正常反应组(4,399-11,182 pmol/L,n=595),P75-90作为中等高反应组(11,183-15,145 pmol/L,n=180),P90以上作为卵巢高反应组(≥15,146 pmol/L,n=119),比较各组在新鲜周期和冷冻胚胎移植周期的妊娠结局.
2.选择因男性因素进入IVF/ICSI周期,由于受精失败或避免重度卵巢刺激综合征发生而取消胚胎移植的病例,并将这部分病人分为两组:卵巢中等反应者为E2峰值在5,000-15,000 pmol/L(n=7).卵巢高反应者为E<,2>峰值>15,000 pmol/L(n=8).对照组为健康、已生育妇女(n=10).在围着床期(hCG+7d/LH+7d)进行子宫内膜活检.通过扫描电镜观察子宫内膜超微结构,免疫组化检测子宫内膜整合素β3和白血病抑制因子 (leukaemia inhibitory factor,LIF) 表达,应用图像分析系统分析结果.
3.应用基因芯片检测卵巢高反应者(n=4)和健康生育妇女(n=3)围着床期子宫内膜的基因表达谱,筛选差异变化的基因,应用荧光定量PCR和免疫组化验证部分变化基因.结合信息学工具和文献检索,分析相关基因功能意义.
结果
1.与正常反应组比较,卵巢高反应组获卵数目增加,卵母细胞和胚胎质量没有差异,临床妊娠率和着床率呈下降趋势,尤其在E<,2>峰值≥15,146 pmol/L时,着床率明显降低(P<0.05).在随后的冷冻胚胎移植周期中,卵巢高反应组的妊娠率和着床率与正常反应组没有差异(P>0.05).
2.在卵巢刺激周期中等反应和高反应组中,子宫内膜的胞饮突形态不典型或缺如,子宫内膜整合素β3和LIF表达均低于自然周期(P<0.05),卵巢高反应者的子宫内膜腺体LIF表达强度较中等反应者显著降低 (P<0.05).
3.经过基因芯片检测,在卵巢高反应者围着床期子宫内膜的基因表达谱中,有364个基因表达变化在2倍以上,其中233个基因上调,131个基因下调.通过PANTHER数据库的生物学过程分析,说明可能通过增强信号传导,调节免疫等生物学过程来适应超生理激素状态.同时荧光定量PCR验证了部分与子宫内膜功能相关的基因 (Mucin-1,OPN,IGFBP5,DPPIV,PLA2G2,SAT和IL6ST等),它们的变化可能与高甾体激素影响子宫内膜接受性相关.
结论
1.卵巢高反应对胚胎质量没有明显不良影响,但影响妊娠率和着床率,高甾体激素可能影响子宫内膜的接受性.
2.卵巢刺激周期的子宫内膜接受性较自然周期下降,卵巢高反应者子宫内膜的接受性可能较中等反应者进一步降低.
3.高反应者子宫内膜基因表达谱的变化反映了高甾体激素对子宫内膜接受性的影响,为进一步的分子机制研究提供了基因靶点.