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目的：构建包含大鼠尿素转运蛋白B（urea transporter B，UT-B）基因的重组腺病毒载体，研究UT-B基因转染对Caco-2细胞中UT-B mRNA和蛋白的表达及尿素转运功能的影响；构建大鼠5/6肾切除肾衰模型，研究经肠道给予重组腺病毒载体对大鼠结肠组织 UT-B mRNA及蛋白的表达及血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水平的影响，为肾功能不全寻找新的基因治疗手段。 方法：取SD大鼠肾髓质，抽提总RNA，逆转录获得cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增大鼠UT-B基因的CDS区全长片段，PCR产物连接至pMD-18T克隆载体，分别以克隆载体pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板，PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列，通过引物重叠区进行PCR拼接，并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列。PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体 pDONR221中，构建入门克隆。入门克隆与表达载体pAd/CMV/V5-DEST使用 LR重组系统进行体外重组，构建表达克隆pAd-UT-B-IRES-EGFP，pAd-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α感受态细胞，筛选阳性克隆，PCR及测序验证。pAd-UT-B-IRES-EGFP用 Pac I酶切线性化后由Lipofectamine2000介导转染293A细胞，包装病毒，收集病毒液并测定滴度。重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞，以含有EGFP但无UT-B的腺病毒空载体为对照，RT-PCR检测Caco-2细胞中UT-B mRNA的表达，Western blot检测UT-B蛋白表达，以14C同位素标记法测定Caco-2细胞尿素转运功能。构建5/6肾切除大鼠肾功能不全动物模型，经肠道给予pAd-UT-B-IRES-EGFP载体，以含有EGFP但无UT-B的腺病毒空载体为对照，检测大鼠肠组织UT-B mRNA和蛋白表达及血BUN水平。 结果：成功克隆了大鼠UT-B基因，构建了pAd-UT-B-IRES-EGFP载体，经PCR及测序验证，该表达载体包含UT-B基因，且序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致。重组的腺病毒感染培养的Caco-2细胞24h后，可检测到UT-B mRNA及UT-B蛋白的表达明显增强（P<0.05），同时尿素转运效率增加（P<0.05）。大鼠5/6肾切除8周后 BUN明显增高（P<0.01），经肠道给予pAd-UT-B-IRES-EGFP载体后，大鼠肠组织 UT-B mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05），而血中BUN明显降低（P<0.05）。 结论：成功构建了包含UT-B和IRES-EGFP的腺病毒表达载体，体外及体内实验均表明，UT-B基因转染可明显提高UT-B mRNA和蛋白表达并能提高尿素转运效率，降低血中BUN水平，为肾功能不全的基因治疗提高了理论依据。