牛DBNL基因对胎盘形成作用机理研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:michael047
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反刍动物妊娠成功率低在世界畜牧业中普遍存在,也是畜牧业发展中亟待解决的问题。妊娠成功的关键在于早期胎儿与母体关系的建立,即胚胎附植与胎盘形成。附植过程中,胎儿绒毛膜分泌干扰素τ(Interferon tau,IFNτ);附植结束后,绒毛膜细胞入侵子宫内膜、形成胎儿胎盘与母体胎盘紧密联系形成胎盘与母体完成连接。DBNL(Drebrin-like adaptor,DBNL)一种F-肌动蛋白结合蛋白,通过胞内信号转导参与到细胞增殖分化、迁移侵袭及凋亡等生命活动中。为研究妊娠早期牛附植与早期胎盘形成过程中DBNL的作用,本研究收集不同日龄的牛胎儿,RT-PCR测定早期妊娠中DBNL的m RNA表达量的变化。分离牛子宫间质细胞与绒毛膜成纤维细胞,并进行转录组测序,分析细胞表达之间的差异;采用RNAi干扰技术敲降DBNL的表达量并检测处理后的子宫间质细胞、绒毛膜成纤维细胞与处理前增殖能力、迁移性与侵袭性的变化。结果如下:1、研究表明,在牛早期妊娠过程中,DBNL的表达量在附植窗口期最高,之后随着胎儿胎盘形成的进程逐步下降,20日龄的胚胎外组织中DBNL的表达量显著高于胎盘形成中胎儿内DBNL的表达量(P<0.05);同时,形成胎盘的绒毛膜子叶、子宫肉阜内的DBNL表达量均显著高于非胎盘区域(P<0.05)。2、分离纯化后的子宫间质细胞与绒毛膜成纤维细胞可传7-8代;经RNAi干扰DBNL表达后,子宫间质细胞与绒毛膜成纤维细胞的迁移性与侵袭性显著低于对照组(P<0.001),绒毛膜成纤维细胞的增殖能力显著(低于对照组P<0.001);加入IFNτ后,子宫间质细胞与绒毛膜成纤维细胞DBNL干扰组的迁移性与侵袭性都显著高于未加IFNτ组(P<0.001),绒毛膜成纤维细胞的增殖能力显著高于未加IFNτ组(P<0.001)。在牛妊娠早期,IFNτ高表达期内DBNL表达量显著高于其他时期,提高了绒毛膜成纤维细胞的增殖能力、迁移性和侵袭性。
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