论文部分内容阅读
背景：长链非编码RNA(Long non-coding RNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,目前越来越多的证据表明长链非编码RNA在基因转录翻译、细胞分化、表观遗传等生命活动中均发挥了重要的调控作用。母系表达基因3(Maternally expressed gene3,MEG3)作为lncRNA家族的一员在肝癌、肺癌、脑膜瘤等多种肿瘤中明显低表达,而其中多数研究均认为MEG3在此类肿瘤中低表达与其编码基因的差异性甲基化区域(DMR)异常甲基化密切相关。近年来许多研究表明,microRNA-148a (miR-148a)在胃癌中表达下调,而其对下游靶蛋白DNA甲基化酶1(DNMT-1)的抑制作用与胃癌的发生发展密切相关。之前的研究表明DNMT-1在MEG3DMR异常甲基化中亦起着重要作用,由此可见miR-148a对于MEG3存在着潜在的调控作用,但是目前对于这两种非编码RNA之间的相关性还有待于进一步的研究。目的：探索MEG3在胃癌中异常表达的机制,揭示miR-148a对MEG3的调控关系及其调控机理。方法：通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织或者各细胞系中miR-148a及MEG3的表达水平,通过甲基化特异性PCR (MS-PCR)检测组织及细胞中MEG3差异性甲基化区域的甲基化水平,通过免疫印迹(Western blot)检测DNMT-1蛋白表达水平。通过转染niR-148a mimics, DNMT1siRNA质粒、MEG3siRNA质粒以及空白对照质粒等方法构建相应的细胞系。通过细胞计数分析检测细胞系增殖情况。结果：1.在52例胃癌组织中共有36(69.23%)例病例中的肿瘤组织MEG3表达低于其所对应的正常黏膜组织,并且其表达下降与MEG3DMR区域甲基化相关。在胃癌细胞系中亦有相似的结果。2.在构建的miR-148a过表达细胞系中,MEG3表达水平升高,而同时DNMT-1蛋白表达水平降低。3.干扰DNMT-1表达之后胃癌细胞系中MEG3的表达量升高,并且在DNMT-1蛋白低表达细胞系中MEG3DMR区域高甲基化状态减弱。4.miR-148a通过作用于MEG3抑制胃癌细胞的增殖。结论：胃癌中miRNA-148a表达水平降低导致其对DNMT-1蛋白抑制作用减弱,而DNMT-1蛋白在MEG3DMR甲基化过程中扮演着重要的角色,其能促进MEG3DMR的甲基化,进而导致MEG3表达水平降低。本研究证实了胃癌中miR-148a对于MEG3的调控作用,探索了miRNA与长链非编码RNA这两类非编码RNA之在肿瘤的发生发展中的作用机制,为胃癌的诊治提供了新的方向。