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第一部分结肠癌中CCR8的表达及临床意义目的：检测结肠癌组织及结肠癌细胞株中趋化因子受体CCR8的表达,并探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测70例结肠癌以及癌旁正常组织中CCR8的表达,采用免疫印迹和流式细胞术检测6株结肠癌细胞株中CCR8的表达。分析结肠癌中CCR8的表达与临床病理特征的关系。结果：免疫组织化学显示在70例结肠癌组织中,CCR8阳性表达率为47.1%(33/70),癌旁正常组织基本不表达CCR8,肠系膜淋巴结中可见趋化因子CCL1表达。结肠癌中CCR8的表达与肿瘤的局部侵犯深度、淋巴结转移和临床分期相关(p<0.01),而与患者年龄、性别、肿瘤体积和分化程度不相关(p>0.05)。CCR8在6株结肠癌细胞株中均有表达,其中SW480细胞株表达相对较高。结论：CCR8在部分结肠癌组织中表达,并与结肠癌的局部侵犯、淋巴转移和临床分期相关,提示其可能参与了结肠癌侵袭和转移的过程。结肠癌细胞株SW480可用于进一步研究。第二部分CCL1/CCR8对结肠癌SW480细胞胞内钙动员、增殖、凋亡和迁移的影响目的：研究趋化因子CCL1及其受体CCR8对结肠癌细胞株SW480胞内钙动员、体外增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法：采用钙离子探针Fluo-3结合流式细胞术,检测CCL1作用于SW480细胞表面的CCR8所引起的胞内钙离子浓度变化。MTT增殖实验、Annexin V/PI检测细胞凋亡和Transwell肿瘤细胞迁移试验检测CCL1对SW480细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。结果：CCL1能够引起SW480细胞内钙离子浓度的升高,且这一效应能够被CCR8拮抗剂MC148所阻断。不同浓度的CCL1作用于SW480细胞24h、48h或72h后并不影响其增殖能力。100ng/ml CCL1或100ng/ml MC148不会促进或抑制5-FU对SW480细胞的凋亡作用。lOng/ml-100ng/ml CCL1能够增强SW480细胞的迁移能力,并呈现浓度依赖性,其作用依赖于CCL1的浓度梯度,并能被MC148所阻断。结论：SW480细胞表面表达的CCR8具有生物学活性。CCL1作用于CCR8能够明显增强SW480细胞的体外迁移能力,但不影响SW480细胞的增殖和抗凋亡能力。第三部分CCL1/CCR8对结肠癌SW480细胞侵袭和转移相关因-子-表达的影响目的：研究趋化因子CCL1及其受体CCR8对结肠癌细胞株SW480侵袭能力和基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法：采用人工基质胶Matrigel结合Transwell小室构建体外侵袭模型,研究CCL1对SW480细胞侵袭能力的影响。用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)和免疫印迹检测CCL1对SW480细胞表达MMP2、MMP9、E-cadherin和VEGF的影响。结果：CCL1能够明显增强SW480细胞的体外侵袭能力,且这一效应能够被CCR8拮抗剂MC148所阻断。100ng/ml CCL1作用于SW480细胞12h后能够显著上调MMP2mRNA和蛋白的表达,并显著下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达,且其效应能被MC148所阻断。100ng/ml CCL1或MC148作用12h后,SW480细胞中MMP9和VEGF的mRNA和蛋白表达水平未发生明显变化。结论：CCL1作用于CCR8能够明显增强SW480细胞的体外侵袭能力,并能够上调SW480细胞MMP2的表达,下调E-cadherin的表达,而对MMP9和VEGF的表达不产生影响。