【摘 要】
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目的:单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗是一种应用最广泛的基因治疗策略,本文着重探讨重组pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的分子机制。方法:1重组pGL3-hTERTp-HSV
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目的:单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗是一种应用最广泛的基因治疗策略,本文着重探讨重组pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的分子机制。方法:1重组pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统分别作用于肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L-02,TUNEL和MTT法检测其对肝癌细胞生长和凋亡的影响;2免疫印迹技术检测细胞凋亡信号Caspase-3,Caspase-8,Caspase-10,Survivin等活化裂解的情况;3观察Caspase-8、Caspase-3、Caspase-10抑制剂对pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV诱导HepG2细胞凋亡的阻断作用。结果:1重组pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞有靶向杀伤作用,而对正常肝细胞的生长几乎没有影响;2免疫印迹技术结果显示随着时间延长,Caspase-8及Caspase-3的酶原逐渐减少、活化片断逐渐增多,Caspase-10酶原无明显变化,Survivin蛋白则逐渐减少;3 Caspase-8抑制剂能明显抑制pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡,Caspase-3抑制剂可以部分抑制凋亡,而Caspase-10抑制剂的抑制作用很弱。结论:重组pGL3-hTERTp-HSV-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡主要是通过激活细胞凋亡死亡受体途径上游的Caspase-8引起的,同时还涉及到Caspase家族的其它成员如Caspase-3等,而同样是作为凋亡上游信号的Caspase-10则没有参与此凋亡过程,此外还涉及到凋亡抑制蛋白Survivin的活性减少。
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