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目的:通过Zea-longa手术方法构建大鼠脑缺血再灌注诱发肾脏损伤的模型并进行评价,探讨SIK2调控自噬对急性肾脏损伤的作用,揭示脑缺血再灌注过程中急性肾损伤的分子机制,为临床上脑卒中患者急性肾脏损伤的有效防治与治疗提供理论和实验依据。方法:随机选取SPF级SD雄性大鼠40只,分为假手术组(n=10),实验组(n=30)。实验组内分为3组,分别是缺血3h,再灌注6h组、12h组和24h组,分别建立大鼠大脑缺血再灌注的模型。假手术组只分离动脉血管不插栓,其余操作同实验组。血流灌注仪监测再灌注过程中各组大鼠大脑血流灌注量的变化情况。各组大鼠再灌注后处死取血浆和肾脏组织,用酶联免疫吸附法测定BUN、Scr、IL-6和TNF-α的表达含量,利用苏木素伊红染色观察大鼠肾脏组织形态结构及其病理形态学的变化,天狼星红染色观察肾脏胶原沉积的情况。随机选取SPF级SD雄性大鼠48只,实验分为8组:Control+AdGFP,MCAO/R+AdGFP,Control+AdSIK2,MCAO/R+AdSIK2,Control+甲基纤维素,MCAO/R+甲基纤维素,Control+Bosutinib,MCAO/R+Bosutinib,利用Q-PCR和Western blot检测SIK2的表达水平。天狼星红染色观察肾脏损伤程度。结果:(1)Peri Cam PSI各组血流灌注量的结果实验组中缺血3h,血流灌注仪示右侧大脑血流灌注量较左侧大脑血流灌注量明显下降,平均下降量为(50.70±0.69)%。当拔出线栓再灌注6h,12h,24h后,平均下降量分别为(38.53±0.24)%、(6.04±0.03)%、(1.56±0.89)%。与再灌6h组相比,再灌12h组、再灌24h组血流灌注下降量有差异(P<0.05)。(2)HE染色各组形态学的结果苏木伊红染色法染色显示实验组肾脏有水肿,红细胞大量渗出,管腔内可见蛋白管型,毛细血管网扩张,胶原纤维增多。天狼星红染色显示实验组肾间质有少量胶原沉积。(3)各组大鼠BUN、Scr、IL-6和TNF-α的表达含量实验组血肌酐、尿素氮较假手术组均升高,再灌注6h时与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05),实验组中IL-6与TNF-α与假手术组相比均升高,当再灌注6h时与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)Q-PCR检测SIK2 mRNA表达量利用Q-PCR技术测定再缺血再灌注过程中SIK2 mRNA的表达水平,再灌注6h后SIK2 mRNA的表达量最低,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。再灌注12h,24h后SIK2 mRNA的表达量逐渐恢复,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。利用Western Blot技术测定不同再灌注时间SIK2蛋白的表达趋势,再灌注6h后SIK2蛋白的表达量最低,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。再灌注12h,24h后SIK2蛋白的表达量逐渐恢复,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(5)各组大鼠天狼星红染色结果天狼星红染色显示:MCAO/R+AdGFP组、MCAO/R+AdSIK2组、MCAO/R+甲基纤维素和MCAO/R+Bosutinib组中部分区域被染色染成红色,MCAO/R+AdSIK2组较其他组胶原着色深,差异有统计学意义(P<0.05)。MCAO/R+Bosutinib组中较其他组胶原着色浅,差异有统计学意义(P<0.05)。而Control组、Control+AdSIK2、Control+甲基纤维素组和Control+Bosutinib组肾脏组织中细胞核被染成蓝色,肾脏间质中无胶原沉着(P>0.05)。(6)各组大鼠SIK2、CREB、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达趋势蛋白免疫印迹检测各组大鼠SIK2、CREB、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平,以探究SIK2、CREB、LC3Ⅰ/Ⅱ之间的调控关系。结果显示:与Control组、Control+AdSIK2、Control+甲基纤维素组和Control+Bosutinib组相比,MCAO/R+AdSIK2组与MCAO/R+Bosutinib组SIK2水平表达有统计学差异(皆P<0.05)。各组CREB表达无统计学差异(P>0.05)。与Control+AdGFP组、MCAO/R+AdGFP组和Control+AdSIK2组,MCAO/R+AdSIK2组表达有统计学差异(P<0.05)。与Control+甲基纤维素组、Control+Bosutinib和MCAO/R+Bosutinib组相比,MCAO/R+甲基纤维素组中LC3Ⅱ表达有统计学差异(P<0.05)。结论:SIK2在脑缺血再灌注急性肾损伤起着重要作用,通过调控自噬参与脑缺血再灌注诱导急性肾脏损伤的发生与发展。