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目的:嗅质或气味能通过嗅觉通路影响脑功能。通过神经行为学观察确定嗅质丁香酚(EG)可以改善C57BL/6对EG的嗅觉认知能力;在此基础上研究EG干预后小鼠嗅上皮嗅觉受体(ORs)mOR-EG的基因表达变化,及通过EG干预体外嗅觉感觉神经元(OSNs)的培养,对OSNs的mOR-EG的基因表达变化进行检测。探讨嗅质改善嗅觉认知及其机制。
方法:
EG干预小鼠从出生开始(PNDO)分别至6w和10w,对EG 6w和6w对照组,EG 10w组和10w对照组。然后进行嗅质偏爱和嗅质辨识实验,检测小鼠对EG的嗅觉认知的变化;通过Real-time PCR技术,比较EG 6w和6w对照组,EG 10w和10w对照组的嗅上皮mOR.EG的基因表达差异,对mOR-EG基因变化与EG的嗅觉认知行为学之间可能的联系进行探讨;利用OMP和TUJ-1的免疫细胞化学和RT-PCR.实验对体外培养的OSNs进行鉴定,后利用30μm,100μm和300μm EG分别干预OSNs培养,再通过Real-time PCR技术对各组mOR-EG的基因表达进行检测,对EG改善嗅觉认知的机制进一步探讨。
结果:
1.EG 6w和6w对照组,EG 10w和10w对照组神经行为学结果之间的比较,EG6w组对EG的嗅觉辨识时间明显快于6w对照组,EG 10w组对EG的嗅觉辨识时间亦明显快于6w对照组;
2.Real-time PCR技术对上述各组嗅上皮mOR-EG的基因表达差异检测,发现EG 6w组的mOR-EG基因表达量明显高于6w对照组,EG 10w组的mOR-EG基因表达量明显高于10w对照组,且EG 6w组和EG 10w组的mOR-EG基因表达量约为相应对照组的9倍; 3.经OMP和TUJ-1的免疫细胞化学和RT-PCR鉴定,体外培养的多数细胞为OSNs。EG不同浓度干预OSNs的培养后,Real-time PCR检测各组mOR-EG基因表达量,发现30μm EG和100μG组的mOR-EG基因表达量明显高于空白对照组,分别约为空白组的2倍和4倍,300μmEG组的mOR-EG基因表达量与空白组之间没有明显差异。
结论:
1.EG能够改善小鼠对EG的嗅觉认知能力;
2.EG干预能够诱导小鼠嗅上皮mOR-EG基因表达;
3.EG体外干预能够诱导OSNs的mOR-EG基因表达。