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【背景】帕金森病(Parkinson disease,PD)是一种成年发病的神经退行性疾病,以α-突触核蛋白异常聚集和黑质致密部多巴胺能神经元的逐步损失为特征。在PD发病相关的众多遗传与环境因素中,线粒体功能障碍和氧化应激与PD发病密切相关。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)辅激活因子1α(PGC-1α)是一种多功能的转录调节因子,是线粒体生物起源和细胞能量代谢的关键调节者,可调控氧化磷酸化、抗氧化防御和自噬。其调控线粒体活动的通路成为潜在的治疗靶点。目前PGC-1α在神经退行性疾病中的作用及其机制已有部分研究,但只有少数研究强调PGC-1α在PD中的作用,且对其与PD的相关性知之甚少。【目的】1.通过慢病毒介导C57BL/6小鼠黑质PGC-1α的过表达2.探讨PGC-1α过表达对帕金森病动物模型线粒体功能的影响【方法】1.动物模型的建立:根据前期摸索的慢病毒转染滴度值和MPTP造模方案建立过表达动物模型和PD动物模型。2.转棒测试和提尾倒立实验检测各实验组小鼠造模前后行为学的变化。3.透射电子显微镜下观察各实验组小鼠黑质线粒体形态。4.WST-1法测定C57BL小鼠黑质SOD的表达水平。5.Western blot和Real-time PCR方法检测各实验组PGC-1α的表达水平。6.免疫组织化学和Western blot方法检测C57BL/6小鼠黑质TH的表达情况。【结果】1.通过Western blot和Real-time PCR方法检测发现P+M组黑质PGC-1α的蛋白水平和转录水平较L+M组显著性升高,实现了C57BL/6小鼠黑质PGC-1α的过表达。2.转棒测试和提尾倒立实验结果显示P+M组行为学及躯干僵直程度较M组、E+M组、L+M组有所改善。3.免疫组织化学和Western blot方法检测小鼠黑质TH的表达发现:M组黑质TH表达较NS组显著降低,P+M组黑质TH表达较L+M组增多。4.WST-1法测定C57BL小鼠黑质细胞内SOD的含量显示:M组较NS组下降,PGC-1α过表达组较L+M组升高。5.透射电子显微镜结果显示:NS组小鼠黑质线粒体呈均质椭圆形,数量较多,内嵴清晰可见;M组小鼠黑质线粒体肿胀呈球形,内嵴消失,基质电子密度降低且不均匀,内见多个局灶性空泡;P+M组小鼠黑质线粒体基质电子密度较均一,内嵴可见,少见空泡。【结论】1.慢病毒对DA细胞具有较高的感染率,LV-GFP-PGC-1α慢病毒在小鼠黑质中实现了PGC-1α的高表达,为进一步研究PGC-1α在PD动物模型中的作用提供了实验依据。2.PGC-1α过表达可以减少MPTP诱导的黑质多巴胺能神经元的损害,改善MPTP诱导的运动协调能力下降和肌张力增高的异常行为学表现。3.PGC-1α过表达诱导SOD的产生,促进ROS歧化解毒,减少MPTP诱导的线粒体氧化损伤。4.PGC-1α过表达可通过保护线粒体的结构及功能减少小鼠黑质多巴胺能神经元的死亡