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香鱼(Plecoglossus altivelis)是东亚地区中国、日本和朝鲜等国家特有的一种小型名贵经济鱼类。香鱼易感弧菌病，由于传染快、死亡率高，给中国沿海地区的香鱼养殖业造成巨大损失。目前香鱼免疫系统研究的仍然滞后，给病害的发现和防治造成诸多困难。急性期反应(acute phase response, APR)对于动物病害的早期诊断和防治具有重要意义。近年来，已有数种鱼类急性期反应蛋白(acute phase protein, APP)被鉴定，并应用于早期诊断中。但与哺乳动物相比，鱼类APR的研究尚处于起步阶段，香鱼急性期基因的鉴定既能丰富鱼类的免疫学知识，又能为鱼类病害免疫防治奠定基础。本研究首先以浙江省宁海地区香鱼养殖厂患弧菌病香鱼为初始材料，从病鱼组织中分离出一株优势菌ayu-H080701。人工感染结果表明ayu-H080701确实为香鱼弧菌病的病原菌，对香鱼的半致死量LD50=1.2×104CFU。综合形态学观察、生理生化特征、16S rRNA基因和金属蛋白酶(metalloprotease, MP)基因的系统进化分析，该菌株被鉴定为鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)。在此香鱼感染模型基础上，应用抑制消减杂交(suppressionsubtractive hybridization, SSH)技术，构建了鳗利斯顿氏菌侵染香鱼的肝组织SSH cDNA文库，从正反向文库中各随机挑取400个克隆进行测序，共获得742个高质量的ESTs (正库386条，反库356条)。经序列拼接和BLAST比对，正反库unigenes各有185条(69.5%)和173条(68.4%)与GenBank中已知功能基因具有较高的同源性。将这些unigenes在生物学过程进行GO (Gene Ontology)基因功能注释和归类分析。结果表明，正反库已知功能的unigenes可分为19和18个类别，其中细胞过程、代谢过程和应激反应3个类别的比例最高；正库免疫系统过程、应激反应、生长和细胞增殖4个类别基因数目大于反库1倍以上。采用RT-qPCR技术进一步验证SSH cDNA文库的筛选结果，表明所建文库的假阳性率为7.1%。随后，从正向文库中挑选一个硬骨鱼类特有的免疫相关基因——Warm temperature acclimation associated protein-2(Wap65-2)作进一步研究。从本实验室构建的香鱼肝组织cDNA文库中获得该基因的全长cDNA序列(AM999340)，采用生物信息学技术鉴定该基因的结构和保守域。实时荧光定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)和Western blot检测结果表明，在鳗利斯顿氏菌侵染香鱼后，aWap65-2的mRNA及蛋白表达量均显著上调。本实验室采用酵母双杂交(Yeast two hybrid, Y2H)技术筛选到一个与aWap65-2互作的蛋白补体C3。在此研究结果基础上，本研究通过5′RACE技术获得香鱼C3(aC3)基因全长cDNA序列(FR714862)，并利用Y2H和GST pull-down技术证明了aWap65-2还能与aC3β链互作。本研究首次以香鱼为模型，采用SSH技术筛选了其细菌感染相关急性期蛋白，其中aWap65-2是正急性期蛋白(positive acute phaseprotein, PAPP)，并可能是通过C3为中心的补体系统参与抗细菌感染的免疫调节反应。