目的应用一般组织学和生物塑化薄层切片技术并结合激光共聚焦显微镜,观察新生儿和成人肛管联合纵肌及肛腺等组织结构,了解其局部组织解剖学特征,为肛瘘发生发展机制的探讨及其手术治疗提供一定的形态学依据。方法①选取新鲜新生儿肛管标本10例,成人尸体肛管标本16例,其中10例新生儿和13例成人肛管标本行石蜡包埋,做连续切片(新生儿6例横切、4例冠状切,成人8例横切、5例冠状切),3例成人肛管标本采用生物塑化技术,制成连续薄层断面切片(横断位1套,矢状位2套)。②一般组织学切片行HE染色,另取邻片Van Gieson(VG)或Verhoeff’s Van Gieson(EVG)弹性纤维染色,观察肛管联合纵肌及肛腺等组织结构。③肉眼或体视学显微镜下观察生物塑化薄层切片,并取部分切片行EVG弹性纤维染色,与一般组织学切片进行对比,观察肛管联合纵肌及肛腺等组织结构。④激光共聚焦显微镜下观察生物塑化薄层切片,了解肛管联合纵肌及肛腺等组织特征。⑤选取上述部分切片摄片,用Photoshop 7.0软件拼接成完整的肛管横切面或纵切面,进一步观察完整切面上肛管联合纵肌及肛腺的组织结构变化、分布特征及其与周围组织的关系。结果①横切和纵切面上,肛管壁由内到外均可分为黏膜层、黏膜下层、肛门内括约肌层、联合纵肌层和肛门外括约肌层,各层境界分明,清晰可辨。②联合纵肌位于肛门内外括约肌之间,为纵行肌层,由内到外又可分平滑肌层和横纹肌层,其中纵行平滑肌为直肠纵肌的延续,纵行横纹肌为肛提肌的骨骼肌纤维向下的延续,即联合纵肌主要由大量的直肠纵肌与小部分肛提肌的纤维向下延续汇集而成。联合纵肌围绕着肛管向下走行,内部的平滑肌层向内发散出许多细小的结缔组织纤维,斜穿肛门内括约肌到达黏膜下层,进而向下走行,并逐渐聚集成弹性纤维束,最终附着于肛周皮肤的真皮;外部的横纹肌层向外发出若干个较粗的肌束或结缔组织纤维束,穿插入肛门外括约肌浅部和深部的肌肉之间,肌束逐渐延续为弹性纤维,深入坐骨直肠窝的脂肪间隙;在肛管末端,联合纵肌肌束放射状伸入肛门外括约肌皮下部,并逐渐延续为弹性纤维,形成若干个肌间隔或纤维间隔,但最终都以弹性纤维附着于肛周皮肤的真皮。③肛腺多为不规则分支管状结构,成人可见葡萄状腺和管泡状腺,而新生儿则仅见管状腺。肛腺腺管的开口处为复层鳞状上皮,往下逐渐分化为复层柱状上皮,随着继续分支,管壁逐渐减薄至双层细胞,终末段分支为单层柱状或立方上皮细胞。腺管管壁上可见散在的杯状细胞,腺腔内可见分泌物。腺管大部分分布在黏膜下层,新生儿最深穿过肛门内括约肌达联合纵肌层,成人则最深延伸至肛门内括约肌层。肛腺及其开口在整个肛管四周散在分布。④经过EVG弹性纤维染色后的生物塑化薄层切片,弹性纤维呈橘红色,肛管壁各层的组织结构及不同的组织成分更易于观察与区分。显微镜下血管壁的弹力膜清晰可见,与肛腺的管腔结构区别明显。⑤激光共聚焦显微镜下以胶原纤维为主的肌纤维末端清晰可辨,弹力膜则无可见荧光。结论①细致地观察与研究了肛管壁联合纵肌的组织解剖学特征,探讨了联合纵肌在排便生理功能及肛瘘的发生发展中的作用。②肛腺与联合纵肌并无明显联系,成人肛瘘的形成是由感染或脓肿沿联合纵肌纤维向其他间隙蔓延引起的,而非沿着肛腺腺管。③首次利用生物塑化薄层切片技术结合激光共聚焦显微镜研究肛管的断层解剖学,更全面地观察与了解了肛管及其相应结构的组织解剖学特征。④首次将生物塑化薄层切片行EVG弹性纤维染色,更有利于生物塑化薄层切片上组织结构的观察。⑤塑化的过程可使胶原纤维在488 nm的激发光下产生内源性自发荧光,而弹性纤维则没有。