蓖麻三磷酸甘油脱氢酶(RcGPDH)基因克隆与功能鉴定

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蓖麻(Ricinus communis L.)为大戟科蓖麻属一年生或多年生草本植物,其种子含油量可高达60%。蓖麻油的主要成分是羟基化的蓖麻油酸(顺式-12-羟基十八碳-9-烯酸),其特殊的羟基化结构决定了蓖麻油具有特殊的性能及广泛的工业用途,蓖麻因此而成为重要的工业油源作物,也是世界十大油料作物之一。目前,针对植物种子油累积的分子机制的报道主要研究了参与三酰甘油(TAG)合成的Kennedy途径中相关酰基转移酶的作用,而为Kennedy途径提供甘油骨架的三磷酸甘油脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)在TAG合成中的作用一直不太受关注。本研究主要探讨蓖麻三磷酸甘油脱氢酶基因(RcGPDH)在TAG合成上的功能,进而阐明在蓖麻油累积过程中的作用。根据已报道的蓖麻种子表达序列标签(Expressed Sequence Tags, EST)设计引物,通过RACE (rapid-amplification of cDNA ends)方法克隆了蓖麻RcGPDH基因并对其序列及所编码的蛋白质结构进行了分析;荧光定量PCR分析结果表明,该基因在蓖麻种子发育后期有较强的表达。为了研究该基因的功能,构建了该基因的酵母表达载体PYES2.1/V5-His -RcGPDH,转化酵母野生型菌株BY4742,运用分光光度法测定转基因酵母的生长曲线,通过香草醛法测定稳定生长期的转基因酵母的油脂含量;构建了在种子特异表达启动子NAPIN启动下的植物表达载体,并通过遗传转化使其在野生型拟南芥中过量表达。结果表明转基因酵母菌株比转空载体对照菌株生长慢,两者均在培养18小时后进入平台期,但油脂含量及脂肪酸组成没有显著的变化。RcGPDH基因在拟南芥中过量表达使转基因拟南芥的种子油脂含量减少而种子增大,同时,转基因拟南芥饱和脂肪酸减少,而多不饱和脂肪酸增加,由此推测该基因可能与蓖麻适应低温胁迫有关,而对油脂累积没有积极的作用。为了能更全面的研究该基因的功能,同时开展了建立蓖麻遗传转化体系的实验。
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