【摘 要】
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目的:本课题通过观察鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白的影响,探讨鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其可能作用机制。方法:选取体质量为240~260g的SPF级雌性SD大鼠55只,随机分为4组,空白组25只,鳖甲组、莪术组、鳖甲-莪术药对组各10只,分组灌喂中药,连续
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目的:本课题通过观察鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白的影响,探讨鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其可能作用机制。方法:选取体质量为240~260g的SPF级雌性SD大鼠55只,随机分为4组,空白组25只,鳖甲组、莪术组、鳖甲-莪术药对组各10只,分组灌喂中药,连续7d后处死,留取血清备用。将储存的血清与DMEM培养基联合配置成体积分数为10%的不同剂量的含药血清培养基,处理MCF-7细胞,分别标记为:空白血清组、鳖甲低剂量组、鳖甲中剂量组、鳖甲高剂量组、莪术低剂量组、莪术中剂量组、莪术高剂量组、鳖甲-莪术药对低剂量组、鳖甲-莪术药对中剂量组、鳖甲-莪术药对高剂量组、阳性对照组。各组在培养箱中孵育48h、72 h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率。各组在培养箱中孵育48h后,流式细胞术检测细胞周期、Western blot法检测β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。结果:1.与空白血清组比较,各含药血清组作用48h、72h后均能抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05);各含药血清不同剂量组间比较,抑制率为:高剂量组>中剂量组>低剂量组(P<0.05);各高剂量组间比较,抑制率为:鳖甲-莪术药对高剂量组>莪术高剂量组>鳖甲高剂量组(P<0.05)。2.与空白血清组比较,各含药血清组作用48 h后,G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.05),S期细胞比例明显减小(P<0.05);各含药血清不同剂量组间比较,G0/G1期细胞比例为:高剂量组>中剂量组>低剂量组(P<0.05),S期细胞比例为:高剂量组<中剂量组<低剂量组(P<0.05);各高剂量组间比较,G0/G1期细胞比例为:鳖甲-莪术药对高剂量组>莪术高剂量组>鳖甲高剂量组(P<0.05),S期细胞比例为:鳖甲-莪术药对高剂量组<莪术高剂量组<鳖甲高剂量组(P<0.05)。3.与空白血清组比较,β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达均降低(P<0.05),各含药血清不同剂量组间比较,蛋白表达量为:高剂量组<中剂量组<低剂量组(P<0.05);各高剂量组间比较,蛋白表达量为:鳖甲-莪术药对高剂量组<莪术高剂量组<鳖甲高剂量组(P<0.05)。结论:1.各组含药血清对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,且同一中药高剂量组抑制效果最佳,同时鳖甲-莪术药对抑制作用效果高于单独用药2.各组含药血清作用MCF-7细胞后均可阻止G1/G0期的细胞顺利进入S期及G2期,从而使MCF-7细胞的有丝分裂过程受到干扰,导致其增殖受到抑制;3.鳖甲-莪术药对含药血清抗MCF-7人乳腺癌细胞的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达,下调β-catenin以及β-catenin下游靶基因Cyclin D1,c-Myc蛋白表达有关。
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