目的：　　 一、克隆人IL-24基因，构建其重组真核表达载体，转染MHCC97-H细胞，G418稳定筛选，观察人IL-24基因在MHCC97-H细胞的表达，进一步研究人IL-24对肝癌细胞的生物学特性的影响；以及抗肿瘤机制。　　 二、为之后构建携带有人E2F-IL-24基因的细胞溶瘤病毒研究，以及相关的体内外实验提供理论依据。　　 方法：　　 1．IL-24基因的克隆与重组克隆载体的构建及鉴定　　 从THP-1(人单核细胞)提取总RNA，行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获IL-24基因cDNA，与pTG19-TVector连接，构建重组克隆载体pTG19-T-IL-24。重组克隆载体以CaCI2法转化E.ColiDH5a并行氨苄青霉素筛选，采用菌落直接PCR、XhoI和BamHI双酶切及序列分析等方法，证实目的片段的存在和序列正确。　　 2．重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24的构建与鉴定　　 将转化重组克隆载体pTG19-T-IL-24的E.ColiDH5a扩大培养后，提取重组载体行XhoI和BamHI双酶切，电泳胶回收目的片段并测定浓度，与经相同双酶切的载体pcDNA3.1(-)连接成重组表达载体pcDNA3.1(-)-1L-24。将重组表达载体转化到E.ColiDH5a并行氨苄青霉素(200μg/ml)筛选过夜，使用菌落行PCR、XhoI和BamHI双酶切等方法确定目标片段的存在和序列正确。　　 3．细胞转染与阳性克隆的鉴定　　 采用脂质体转染法将重组表达载体和对照组转染MHCC97-H细胞。以仅加脂质体MHCC97-H细胞为空白对照，空载体pcDNA3.1(-)转染后MHCC97-H细胞为阴性对照。37℃、5％CO2静置培养48h后，消化细胞提取总RNA，RT-PCR，电泳，检测IL-24基因的存在以确定成功转染。　　 4．采用递度浓度方法检测MHCC97-H细胞的对G418的敏感性，G418稳定筛选相同方法转染的MHCC97-H细胞4周。　　 5．IL-24基因表达的检测　　 取对数生长期的转染IL-24基因后的MHCC97-H细胞，消化细胞提取总RNA，行RT-PCR，电泳检测mRNA的表达；提取蛋白采用Western-blot法检测IL-24蛋白的表达。以未转染IL-24细胞组、转染pcDNA3.1(-)组作为对照。　　 结果：　　 1．IL-24基因的克隆、重组克隆载体pTG19-T-IL-24的构建与鉴定　　 THP-1提取总RNA后行RT-PCR，可见一大小约620bp的特异性条带，与目的片段大小一致(620bp)，提示IL-24cDNA片段可能成功克隆。将pTG19-T-IL-24转化E.ColiDH5a，筛选出阳性菌落。将阳性菌落PCR产物、重组克隆载体XhoI和BamHI双酶切产物行电泳检测，可见与目的片段大小一致的特异性条带(620bp)，测序结果与Genebank报道的序列相同，提示pTG19-T-IL-24成功构建。　　 2．重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24的构建与鉴定　　 将重组表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24转化E.ColiDH5a后采用氨苄青霉素筛选出阳性菌落。将阳性菌落PCR产物行电泳检测以及重组表达载体经过XhoI和BamHI双酶切后产物电泳检测，均发现与目的片段大小一致的特异性条带(620bp)，提示pcDNA3.1(-)-IL-24成功构建。　　 3．转染后阳性细胞的筛选与鉴定　　 取常规培养MHCC97-H细胞、阴性对照和实验组的细胞提取总RNA，行RT-PCR。扩增产物经电泳发现实验组存在特异性条带(620bp)，而常规培养MHCC97-H细胞、阴性对照均未见明显条带，提示重组表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24成功转染，且对照组均无IL-24mRNA表达。阴性对照和实验组的细胞筛选4周后形成明显细胞集落而未转染组细胞全部凋亡。　　 结论：　　 IL-24基因获成功克隆并构建了重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24。转染IL-24基因后的MHCC97-H细胞经RT-PCR发现存在特异性DNA片段。IL-24基因在MHCC97-H细胞中可表达IL-24mRNA。上述结果将有助于深入研究IL-24的抗肿瘤机制及对肝癌进行基因治疗的探索。