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目的:1、通过检测RNF43在浸润性乳腺癌肿瘤及其配对的癌旁正常组织中的表达差异,探讨其在浸润性乳腺癌发生发展中的作用。2、观察RNF43基因沉默对人浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3的生物学功能影响。3、通过在裸鼠体内建立移植瘤模型,观察RNF43沉默对浸润性乳腺癌肿瘤的生物学影响。方法:1、在福建医科大学附属第二医院手术室收集20例手术切除的浸润性乳腺癌及其配对的癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5cm,均经病理证实)各一份,利用qRT-PCR、Western blot分别检测浸润性乳腺癌和癌旁正常组织中RNF43mRNA和蛋白的表达。2、通过构建慢病毒包装的RNF43siRNA载体转染人浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3,同时应用qRT-PCR方法检测RNF43siRNA的干扰效率,筛选出干扰效率最强的RNF43siRNA,并用Western blot验证RNF43蛋白的表达情况。细胞实验分为6组:1)利用RNF43siRNA干扰RNF43表达的MDA-MB-231为实验组(MDA-MB-231sh-RNF43组)。2)NCsiRNA处理的MDA-MB-231为阴性对照组(MDA-MB-231sh-ctrl组)。3)未经任何处理的MDA-MB-231为空白对照组(MDA-MB-231mock组)。4)利用RNF43siRNA干扰RNF43表达的SK-Br-3为实验组(SK-BR-3 sh-RNF43组)。5)NCsiRNA处理的SK-Br-3为阴性对照组(SK-BR-3 sh-ctrl组)。6)未经任何处理的SK-Br-3为空白对照组(SK-BR-3 mock组)。各组分别采用qRT-PCR和Western blot分别检测RNF43基因在mRNA水平和蛋白水平的表达情况,从而判断RNF43在空白对照组、阴性对照组、实验组细胞中的表达情况。利用MTT法、流式细胞技术和Transwell分别检测转染各组细胞的增殖、凋亡与周期、侵袭和迁移的变化情况。各种实验均重复3次,并进行统计学分析。3、将16只裸鼠分为四组:1)阴性对照组(MDA-MB-231 shRNA组)。2)实验组(MDA-MB-231 shRNF43组)。3)阴性对照组(SK-BR-3 shRNA组)。4)实验组(SK-BR-3 shRNF43组)。喂养于SPF级动物房中,1周后发现所有裸鼠状态良好,在相应四组裸鼠的背侧将转染成功且处于对数生长期的四组细胞进行皮下接种,出瘤后7天、28天、34天、40天、44天量一次肿瘤体积,接种44天后处死所有裸鼠,取下肿瘤,观察肿瘤形态、称重、绘制生长曲线。结果:1、浸润性乳腺癌中RNF43的表达量较与其配对的癌旁正常组织明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、转染RNF43siRNA的人浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3均较空白对照组、阴性对照组细胞的RNF43 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05);实验组细胞的增殖率显著低于空白对照组、阴性对照组细胞(P<0.05),实验组增殖明显受到抑制;流式细胞技术发现实验组凋亡细胞比例明显升高(P<0.05);流式细胞技术周期检测发现实验组细胞出现G1期停滞(P<0.05);Transwell侵袭检测实验组细胞侵袭能力较空白对照组、阴性对照组细胞下降(P<0.05);Transwell迁移检测实验组细胞迁移能力较空白对照组、阴性对照组细胞下降(P<0.05)。3、接种7天后四组裸鼠全部有肿瘤生长,肿瘤呈分叶状,切面灰白,44天后测量四组裸鼠的瘤体体积:MDA-MB-231shRNA阴性对照组(729.47±84.06mm~3)较MDA-MB-231shRNF43实验组(346.29±108.32mm~3)升高,具有统计学差异(P<0.05);同理SK-BR-3 shRNA阴性对照组(656.23±68.30 mm~3)较SK-BR-3shRNF43实验组(217.93±81.24mm~3)升高,具有统计学差异(P<0.05)。四组裸鼠瘤体的重量:MDA-MB-231shRNA阴性对照组(0.58±0.09g)较MDA-MB-231shRNF43实验组(0.26±0.07g)升高,具有统计学差异(P<0.05);同理,SK-BR-3shRNA阴性对照组(0.43±0.09g)较SK-BR-3shRNF43实验组(0.16±0.04g)升高,具有统计学差异(P<0.05)。结论:1、RNF43的异常表达与浸润性乳腺癌的发生、发展有关,其有可能成为诊断及治疗浸润性乳腺癌的生物学标记物之一。2、RNF43siRNA能成功干扰RNF43的表达,RNF43在人浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3的低表达能抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力。说明RNF43可能是一种重要的致癌基因,能够促进乳腺肿瘤细胞的生长和增殖,RNF43在浸润性乳腺癌的生物学功能中起着肿瘤促进因子的作用。3、所有裸鼠接种7天后观察均有瘤体生长,MDA-MB-231shRNA阴性对照组和SK-BR-3shRNF43实验组肿瘤生长速度相对较慢,说明浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3可以成功建立浸润性乳腺癌裸鼠移植瘤模型,且下调RNF43对浸润性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-Br-3裸鼠移植瘤有抑制作用。