黄姑鱼(Nibea albiflora)是我国重要的海水网箱养殖鱼类之一,在浙、闵沿海具有较大的养殖规模。网箱养殖过程中,黄姑鱼容易受大黄鱼等邻网养殖鱼类病原体的感染,给其养殖带来巨大危害。本研究分析了黄姑鱼分别感染杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)和Poly I:C后的病理特征和免疫基因应答反应。研究结果如下:1.感染杀香鱼假单胞菌的黄姑鱼有明显的鳍条表面出血、色素沉积、肠道红肿和肠道内黄色液体堆积等病理现象,组织切片显示其肝有明显细胞空泡化、脾有明显的巨噬细胞浸润。而Poly I:C刺激后黄姑鱼的肝与脾组织切片观察未发现明显的病变。2.荧光定量分析结果表明,黄姑鱼感染杀香鱼假单胞菌或注射Poly I:C后,其肝、脾和鳃等组织中icCu/Zn-SOD、MnSOD、ecCu/Zn-SOD、HSP70和HSP90等基因的mRNA表达量显著上调。与对照组相比,Poly I:C刺激后0-72 h内,肝脏、脾脏和鳃中的上述基因的表达量均上调;感染杀香鱼假单胞菌后0-48 h内,肝脏、脾脏和鳃中的上述基因的表达量均上调,感染72 h上述基因在肝中表达量显著下调,icCu/Zn-SOD、MnSOD和HSP70基因在脾中表达量显著下调,icCu/Zn-SOD在鳃中表达量下调。与对照组相比,Poly I:C刺激后肝中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和HSP70、HSP90蛋白表达均上调,与其mRNA的表达趋势基本一致;感染杀香鱼假单胞菌后肝中T-SOD活性先升高再下降,而HSP70和HSP90蛋白表达变化呈现波动趋势。对黄姑鱼的三个Toll样受体(TLR)基因进行了克隆分析,得到TLR3的cDNA序列全长为3,601 bp,开放阅读框为2,739 bp,编码912个氨基酸;TLR5的cDNA序列全长为2,225 bp,开放阅读框为1,932 bp,编码643个氨基酸;TLR14的cDNA序列全长为3,645 bp,开放阅读框为2,634 bp,编码877个氨基酸。其氨基酸序列同源性分析表明TLR3、TLR5s和TLR14均与鮸鱼(Miichthys miiuy)的相似度最高,均在90%以上;均包含TLR组基序,例如富含亮氨酸的重复(LRR)域。组织差异性表达分析表明TLR3、TLR5s和TLR14在受检的12个组织中均有表达。Poly I:C或杀香鱼假单胞菌刺激后通过qRT-PCR分析上述三个基因在肝、脾和鳃中表达变化,在上述组织中发现TLR3、TLR5s和TLR14的表达量均发生了显著变化。上述结果表明这八个基因均参与了黄姑鱼的免疫调节,为进一步免疫应答的分子机制解析提供了基础数据。