重组铜绿假单胞杆菌延长因子Tu与脂蛋白(a)的相互作用

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wzxisno2
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铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa)表面的翻译延长因子Tu (Elongation factor Tu, Tu)可与人纤溶酶原(Plasminogen, Plg)特异性结合,这种结合态的Pig被激活后可降解宿主胞外基质,有利于致病菌穿越组织屏障。本实验室提出,由于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a), Lp(a)]中的apo(a)与Pig具有高度同源性,可以抑制病菌与Pig的结合,因此可能具有潜在的抗感染作用。为验证Lp(a)是否可与铜绿假单胞杆菌表面Tu特异性结合,进而竞争性抑制Pig与Tu的结合,本文进行了如下研究:(1)在大肠杆菌中表达并纯化了重组Tu (Recombinant Tu,rTu)蛋白及重组TA蛋白(Recombinant TuK394A, rTA),通过ELISA实验发现:①rTu、rTA蛋白与Pig、Lp(a)结合,与低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL)不结合,表明rTu与Lp(a)的结合可能与apo(a)有关。②赖氨酸类似分子6氨基己酸(ε-aminocaproic acid, EACA)对rTu蛋白与Pig、Lp(a)的结合有一定的抑制作用,表明rTu蛋白可能是与Pig、Lp上的赖氨酸结合位点(Lysine-binding sites, LBS)有关。③较高浓度的Lp(a)能抑制Pig与rTu的结合,表明Pig及Lp(a)与rTu的结合位点有相同之处。(2) ELISA实验发现:①Pig、Lp(a)和LDL都可以与铜绿假单胞杆菌结合,且不同生长时期菌的结合值无显著差异。②EACA对铜绿假单胞杆菌与Pig、Lp(a)的结合有一定的抑制作用,表明其结合与Pig、Lp上的上的LBS有关。(3)制备并纯化得到鼠抗rTu多克隆抗体(Mouse anti-rTu IgG, rTu抗体)。通过ELISA实验发现:①rTu抗体能抑制rTu与Lp(a)的结合。②不同生长时期铜绿假单胞杆菌表面Tu表达量有差异,但因该菌表面还有其他Lp(a)结合蛋白,因而不同生长时期的铜绿假单胞杆菌与Lp(a)的结合能力并无显著差异。
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