【摘 要】
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目的:肝癌作为最常见的肿瘤之一,迄今为止,肝癌的初步筛查以及血液学诊断仍依赖于血清甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)值。然而临床上仍有30%-40%的肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者甲胎蛋白呈阴性,这一现象造成一部分患者的诊断难度增加,甚至延误早期治疗。目前对外泌体与肝癌之间关系的研究仍较少,本研究将通过肝癌患者血浆外泌体蛋白质组学
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目的:肝癌作为最常见的肿瘤之一,迄今为止,肝癌的初步筛查以及血液学诊断仍依赖于血清甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)值。然而临床上仍有30%-40%的肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者甲胎蛋白呈阴性,这一现象造成一部分患者的诊断难度增加,甚至延误早期治疗。目前对外泌体与肝癌之间关系的研究仍较少,本研究将通过肝癌患者血浆外泌体蛋白质组学分析,寻找有价值的肝癌诊断标志物。方法:首先,我们使用外泌体提取试剂盒提取21例肝癌患者和15例健康志愿者的血浆外泌体。随后我们将21例肝癌病人患者和15例健康志愿者的血浆外泌体各随机分为三组并将组内所有样本混合,以非标记蛋白质组学技术利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法定量6组样本中的蛋白,应用京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、基因本体(Gene Ontology,GO)等生物信息学方法分析蛋白质组学数据,并收重新收集7例肝癌患者和7例健康志愿者的血浆样本,提取外泌体后以蛋白质印记(Western blot,WB)验证部分蛋白质组学结果。结果:1.蛋白质组学检测结果说明HCC患者和健康志愿者的血浆外泌体中27种蛋白质水平存在差异,其中上调数目13种,下调数目14种。2.KEGG通路分析显示,生长激素的合成、分泌和作用(Growth hormone synthesis,secretion and action)、补体途径(Complement and coagulation cascades)在HCC组表现出显著差异。3.GO分析显示,在两个比较组中异型细胞粘附的正调控(positive regulation of heterotypic cell-cell adhesion)等重要生物过程(Biological Process,BP);生长因子复合物(growth factor complex)等细胞组分(Cellular Component,CC);胰岛素样生长因子结合(insulin-like growth factor binding)等分子功能(Molecular Function,MF)发生了显著性变化。4.WB验证结果:补体C1q子成分B亚基(C1QB)、补体C1q子成分C亚基(C1QC)、补体4结合蛋白β链(C4BPB)、转化生长因子β诱导基因(TGFBI)在肝癌病人血浆外泌体中高表达。结论:C1QB、C1QC、C4BPB、TGFBI等在肝癌病人血浆外泌体中高表达并可作为肝癌潜在的诊断标志物。
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