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第一部分 不同品系小鼠肥胖哮喘模型建立及比较目的:探讨不同品系小鼠营养性肥胖合并哮喘模型特点。方法:选用KM,BALB/c,C57BL/6j三个品系3-4周龄清洁级雌性小鼠,随机分为A组(正常对照组)、B组(正常哮喘组)、C组(肥胖组)、D组(肥胖哮喘组),分别以高脂饲料及普通饲料饲喂小鼠12周后,以卵清蛋白(OVA)及磷酸盐缓冲液(PBS)致敏激发小鼠,每周记录各组小鼠身长、体重变化,实验终点测定小鼠体重、身长、脂肪重量、肝脏重量、Lee’s指数;全自动生化分析仪测定小鼠血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平;酶联免疫吸附法测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清液中OVA特异性IgE浓度。肺及脂肪组织进行病理HE染色,观察各组脂肪细胞形态改变、脂肪细胞横截面积、肺及支气管炎症及气道重塑情况。采用SPSS19.0软件进行统计,采用单因素方差分析进行比较,先行方差齐性检验,两两比较采用LSD检验。结果:与正常饲料喂养的小鼠相比,高脂饲料喂养的KM小鼠,体重、脂肪重量、肝脏重量、脂肪细胞横截面积均明显增加(P<0.01),Lee’s指数、血清TC水平增加也有显著性差异(P<0.05);OVA致敏及激发后KM小鼠BALF上清液中OVA特异性IgE浓度无显著性差异(P>0.05),肺脏及支气管病理检查中炎症细胞浸润、腺体增生及气道平滑肌、基底膜增厚表现不明显。相同条件饲养的BALB/c小鼠,体重、脂肪重量、肝脏重量、Lee’s指数均明显增加(P<0.01),脂肪细胞横截面积、血清TC水平增加也有显著性差异(P<0.05);OVA致敏及激发后BALB/c小鼠出现典型的哮喘发作表现,BALF上清液中OVA特异性IgE浓度增加有显著性差异(P<0.01),肺脏及支气管病理检查中炎症细胞浸润、腺体增生及气道平滑肌、基底膜增厚表现最为明显。相同条件饲养的C57BL/6j小鼠体重、脂肪重量、肝脏重量、Lee’s指数增加(P<0.05)较不稳定,脂肪细胞横截面积、血清TC水平无显著性差异(P>0.05);OVA致敏及激发后C57BL/6j小鼠BALF上清液中OVA特异性IgE浓度有显著性差异(P<0.05),肺脏及支气管病理检查中出现炎症细胞浸润、腺体增生表现,但气道平滑肌、基底膜增厚表现不明显。结论:BALB/c小鼠经高脂饲料诱导,OVA致敏激发后能形成良好的肥胖合并哮喘模型,可作为研究肥胖合并哮喘更加合适的模型动物。第二部分NKT细胞在小鼠肥胖合并支气管哮喘发病中作用机制目的:通过观察肥胖合并哮喘小鼠气道炎症,气道反应性、NKT细胞数量、分泌细胞因子、细胞表面标记和血清细胞因子的变化,初步探讨NKT细胞在肥胖合并哮喘中的作用及机制。方法:雌性BALB/c小鼠随机分为4组,每组6只,分别为:空白对照组(A组),哮喘模型组(B组),肥胖组(C组),肥胖合并哮喘组(D组)。高脂饲料饲养诱导肥胖模型,OVA致敏激发制备支气管哮喘模型,处死小鼠,收集肝脏及肺组织标本。双室体积描记法测定小鼠特殊气道阻力。病理HE染色观察肺部及气道炎症、气道重塑等表现。ELISA法检测血清IL-4和IFN-Y浓度。流式细胞学检肝脏NKT细胞及CD69+NKT细胞数量、及NKT细胞胞内细胞因子IL-4和IFN-γ表达情况。结果:单纯肥胖组小鼠在低浓度乙酰甲胆碱雾化时表现出明显升高的气道阻力(P<0.01),但在中高浓度的乙酰甲胆碱雾化时与正常小鼠相比,气道阻力有增加但无统计学意义(P>0.05);肥胖合并哮喘组小鼠气道阻力在各浓度乙酰甲胆碱雾化时均表现出于其他各组明显增加的趋势(P<0.01),肥胖合并哮喘组表现最为明显。单纯肥胖组小鼠肺脏病理无明显变化。哮喘及肥胖哮喘组小鼠肺脏病理表现出炎症细胞浸润、腺体增生等气道炎症表现,可见气道平滑肌、基底膜增厚表现,以肥胖合并哮喘组小鼠肺部表现最为明显。与正常对照组相比,肥胖组小鼠血清IL-4浓度有升高明显,哮喘组及肥胖哮喘组血清IL-4浓度明显升高,均有显著性差异,以肥胖组血清IL-4浓度最高。与正常对照组相比,肥胖组小鼠血清IFN-γ浓度有降低,有显著性差异(P<0.05),哮喘组及肥胖哮喘组血清IFN-γ浓度明显降低,均有显著性差异(P<0.01),以肥胖哮喘组血清IFN-γ浓度最低。较之正常对照组,哮喘组小鼠CD1d+NKT细胞百分比、IL-4+NKT细胞百分明显增加,IFN-γ+NKT细胞百分比明显减少;肥胖组小鼠CD1d+NKT细胞百分比及IFN-γ+NKT细胞百分比明显降低,IL-4+NKT细胞百分比明显增加;肥胖哮喘组CD1d+NKT细胞百分比升高最为明显,IL-4+NKT细胞百分比升高,IFN-γ+NKT细胞百分比降低最为明显。各组间CD69+NKT细胞百分比与IFN+NKT细胞变化并不一致。结论:NKT细胞在肥胖、哮喘的过程中通过细胞数目的变化及分泌细胞因子功能的变化,在气道炎症、气道反应性等方面发挥了重要的作用。