在猪群中,猪圆环病毒（Porcine Circovirus,PCV）是常见的病原之一。该病毒的传播主要是由不同猪群间动物个体的流动引起的,PCVs也可能发生跨物种传播（如猪传染给啮齿动物、猪传染给牛、猪传染给毛皮动物等）。同时PCV在猪群中的阳性率很高,长期威胁着我国养猪业,阻碍着养猪业的经济发展。应用感染性克隆拯救病毒进而研究病毒的复制和病毒的致病机制是目前病毒学研究的常用策略。本研究在我国湖南省某猪场发现并鉴定了一种与其他圆环病毒有明显差异的新型圆环病毒,命名为PCV4。通过测序分析,发现其基因组的大小是1770个核苷酸。为了调查这种新病毒的流行情况,建立了Taq Man?探针法定量PCR技术,对2017年10月到2019年5月期间收集的来自湖南省不同猪场的187份猪的临床样本（包括血清样本、组织样品、鼻腔拭子和肛拭子）进行检测。结果显示,该病毒在不同样品中分布不同:187份样品中有24份为阳性,PCV4的总体阳性率为12.8%,鼻拭子阳性率最高（28.5%,6/21）,其次是血清样本（13.4%,11/82）,组织样品次之（8.7%,4/46）,肛拭子阳性率最低（7.9%,3/38）。PCV4在同时感染PRRSV（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome）或PCV2的猪中也被发现。被调查的猪大多有严重的临床症状,包括肠道、呼吸道疾病和猪皮炎与肾病综合征。然而,在健康猪中也检测到PCV4的DNA。PCV4基因组与水貂圆环病毒同源性最高（66.9%）,与其他PCV基因组的同源性为43.2%-51.5%。预测了其两个主要的基因,即复制酶（Replicase,Rep）基因891 nt和衣壳（Capsid,Cap）基因687nt。进一步对这两个基因的系统进化和氨基酸序列比对分析,表明PCV4是圆环病毒属中一个独立的新物种。本研究同时利用p HUE原核表达系统表达了PCV4的复制酶蛋白（Rep）与衣壳蛋白（Cap）,通过免疫Balb/C小鼠获得了其多克隆抗体。分离和获得病毒毒株是研究病毒复制和感染机制的关键,但由于尝试分离PCV4未成功,为获得PCV4病毒,根据实验室测得的PCV4基因组,构建了PCV4感染性克隆（单拷贝基因组与串联的双拷贝基因组整合到p MD19-T载体）,转染BHK-21细胞,利用制备的小鼠多抗采用免疫荧光（Immuno Fluorescence Assay,IFA）实验鉴定转染和病毒拯救的效果。结果表明单拷贝基因组转染效果比双拷贝基因组好。但在细胞盲传五代后,基因Rep蛋白多抗的荧光很弱几乎观察不到,可能是因为拯救的病毒量太低或者是因为病毒不能在细胞中稳定传代。本实验为深入研究PCV4的分子生物学特征及其在细胞中的复制机制提供了重要的基础。